CO089 - RADIOMARCAJE DE VIRUS ADENOASOCIADOS PARA MONITORIZACIÓN IN VIVO DE SU BIODISTRIBUCIÓN EN UN MODELO MURINO DE INMUNOTERAPIA GÉNICA POTENCIADA POR RADIOTERAPIA
1Unidad de Radiofarmacia, Unidad de Imagen Molecular Traslacional, Clínica Universidad de Navarra, Pamplona, España. 2Programa de Tumores Sólidos, CIMA-Universidad de Navarra, Cancer Center Clínica Universidad de Navarra (CCUN), Pamplona, España. 3Instituto de Investigación Sanitaria de Navarra (IdiSNA), Pamplona, España.
Introducción: El marcaje de partículas virales con tecnecio-99m podría ofrecer información sobre su biodistribución in vivo. Este estudio se centró en desarrollar un procedimiento de marcaje con tecnecio-99m de virus adenoasociados (AAV) para evaluar su biodistribución en la transducción tumoral mediada por un AAV que expresa IL-12 mediada por un promotor inducible por interferón (AAV-iIL12) en un modelo de inmunoterapia génica potenciada por radioterapia local.
Material y métodos: Tras la optimización de la cantidad de Sn (II) y de partículas virales (pv), con ratios 99mTc/proteína 1:25, 1:10, 1:5 y 1:2,5, para los experimentos in vivo se añadieron 40 μL de SnCl2·2H2O 1,5 mg/mL acidificado y 50-100 MBq de [99mTc]NaTcO4 sobre 100 μL de pv en PBS. El rendimiento del radiomarcaje se determinó mediante radioTLC (iTLC-SG::FM:2-butanona). Se implantaron 5 × 105 células B16 (melanoma) en ambos flancos en ratones C57BL/6 (n = 12, 3 grupos G1, G2, G3). En el primer grupo se hizo administración intravenosa de 99mTc-AAV (11 ± 0,8 MBq::1010 pv) e intratumoral en los grupos 2 y 3 (3,5 ± 0,3 MBq::109 pv). En G2 solo el tumor derecho se irradió localmente con 8 Gy antes de inyectar 99mTc-AAV, mientras en G3 no se radió. Las imágenes microSPECT/CT se adquirieron a 30’, 3 h, 24 h tras la administración; tras eutanasia a 24 h, se cuantificó la radiactividad presente en tumores, hígado y cerebro en contador gamma.
Resultados: La optimización de las condiciones de marcaje permitió obtener un rendimiento > 99%. A 3h, 99mTc-AAV administrado intratumoralmente se localizó mayoritariamente (> 50%) dentro de los tumores, mientras que 99mTc-AAV por vía intravenosa mostró tropismo por el hígado. La irradiación del tumor favoreció la retención en este de pv 24h después de la inyección (54,8% ± 5,9 vs. 36,2% ± 13,0 % dosis inyectada). El análisis ex vivo confirmó mayor retención de cápsides en los tumores irradiados.
Conclusiones: Las imágenes SPECT/CT tras el marcaje de AAV-iIL12 con tecnecio-99m proporcionaron información relevante sobre la biodistribución del vector. La irradiación del tumor mejoró la retención y transducción de AAV, sugiriendo un nuevo mecanismo de dianización que podría mejorar la eficacia de las terapias génicas basadas en virus adenoasociados.
