La rápida identificación de un microorganismo es especialmente importante en el caso de los hemocultivos positivos, debido a que puede orientar tanto sobre el origen de la bacteriemia como sobre el adecuado tratamiento antibiótico. Algunos estudios han utilizado métodos rápidos y fiables para la identificación bacteriana, entre ellos la aglutinación de látex directamente del hemocultivo positivo1–6. En los últimos años, en nuestro hospital hemos detectado un incremento de las bacteriemias causadas por Streptococcus pneumoniae, Enterococcus spp. y otros Streptococcus spp., que pasó del 14,4% de los microorganismos aislados en hemocultivos en el año 2001 al 18,8% en 2007. En aproximadamente un 10% de estos hemocultivos la tinción de Gram no permite visualizar los microorganismos debido a su lisis o bien se puede observar la presencia de estreptococos alterados morfológicamente con lo que resulta difícil la orientación diagnóstica7. Neumococo y enterococo presentan una morfología similar, por ello en determinados casos se puede retrasar el inicio de un tratamiento antibiótico adecuado.
Entre noviembre de 2005 y mayo de 2008, valoramos prospectivamente la combinación de 2 tests de aglutinación de látex: Slidex Pneumo-kit® (SP) (bioMérieux, Marcy L’Etoile, Francia) y Streptococcal Grouping Kit® (SG) (Oxoid LTD, Basingstoke, Hants, Reino Unido). El estudio se realizó en la primera botella BacT/Alert (estándar o FAN) positiva de un paciente en cuya tinción de Gram se visualizaban cocos grampositivos agrupados en forma de diplococos, cadenas de diplococos, cadenas regulares bien definidas, cadenas alteradas y cadenas decoloradas, o bien ante la primera botella positiva que presentaba hemólisis (botella estándar) y una tinción de Gram negativa. La utilización conjunta de estos dos látex comercializados no había sido descrita previamente por otros autores. En ambos látex se centrifuga 1ml del caldo de la botella del hemocultivo positivo a 2.500rpm durante 10min. Para el SP, se depositaba una gota del reactivo de látex y una gota del control de látex en un portaobjetos al que se le añadía 1 gota del sobrenadante; para el SG, se depositaba 1 gota de cada grupo de reactivo (A, B, C, D, F y G) en la tarjeta de reacción y se le añadía 1 gota del sobrenadante. Seguidamente se mezclaban los reactivos y se agitaban durante un máximo de 2min, tras lo que se observaba el resultado de la reacción de aglutinación. Paralelamente, se procedía a la identificación del germen causal según procedimientos estándar de microbiología8. En caso de discrepancias se utilizaba la galería API STREP® (bioMérieux, Marcy L’Etoile, Francia).
Se evaluó un total de 243 hemocultivos positivos sin detectar problemas en la lectura de ambas técnicas de aglutinación de látex en función de si la botella positiva era estándar o FAN. El test SP presentó una sensibilidad (S) del 89,7% y una especificidad (E) del 98,4% para identificar S. pneumoniae. Dos de los 26 S. viridans que se aislaron durante el estudio presentaron una reacción cruzada con S. pneumoniae. Los resultados del test SP para los distintos microorganismos se resumen en la tabla 1. El test SG se realizó en 199 (82%) de los 243 hemocultivos positivos, y presentó para S. agalactiae una sensibilidad del 100% y una especificidad del 99,4%, mientras que para los enterococos, la aglutinación con el grupo D presentó una sensibilidad del 75% (sin aglutinación de 8 E. faecium y 2 E. faecalis) y una especificidad del 98,7%. Esta baja sensibilidad en los enterococos puede deberse a que sólo el 80% de los enterococos tienen el antígeno D9. Dado que estos látex no permiten distinguir entre E. faecalis y E. faecium, la detección de un diplococo grupo D puede ayudar a plantear al clínico la posibilidad de no utilizar cefotaxima como tratamiento antibiótico empírico y administrar vancomicina hasta tener el resultado del antibiograma.
Microorganismos y resultados del Slidex Pneumo-kit® (SP) para todos los hemocultivos positivos.
| Tinción | Microorganismo | Positivo | Negativo | No realizado | Total |
| Diplococosa | S. pneumoniae | 105 | 12 | 0 | 117 |
| E. faecalis | 0 | 17 | 2 | 19 | |
| E. faecium | 0 | 18 | 3 | 21 | |
| Cadenasb | S. agalactiae | 0 | 20 | 14 | 34 |
| S. bovis | 0 | 5 | 1 | 6 | |
| S. canis | 0 | 1 | 0 | 1 | |
| S. constellatus | 0 | 2 | 0 | 2 | |
| Gemella haemolysans | 0 | 3 | 0 | 3 | |
| S. dysgalactiae | 0 | 0 | 2 | 2 | |
| S. mitis | 1 | 13 | 0 | 14 | |
| S. viridans | 1 | 11 | 0 | 12 | |
| S. pyogenes | 0 | 3 | 4 | 7 | |
| Streptococcus betahemolíticos grupo F | 0 | 4 | 1 | 5 | |
| Total | 107 | 109 | 27 | 243 |
La alta especificidad de estos dos látex señala que una aglutinación positiva puede ser de gran utilidad cuando encontramos un hemocultivo que presenta hemólisis junto a una tinción de Gram negativa o ante la presencia de estreptococos alterados morfológicamente. SP presenta como principal limitación la posible aglutinación cruzada con S.viridans, por lo que la agrupación de los cocos en cadenas regulares en la tinción de Gram puede ser de gran valor para detectarlas. En cuanto a SG, presenta muy buenos resultados para S. agalactiae, con la limitación de una baja sensibilidad para el enterococo spp., por lo que sólo permite comunicar al clínico de forma rápida el 75% de los aislamientos del hemocultivo.
Concluimos que la utilización de ambas técnicas de látex puede proporcionar una identificación preliminar 18-24h antes que la visualización de las colonias procedentes del hemocultivo positivo; con esto mejora la información que recibe el clínico en la primera notificación del hemocultivo positivo y, además, es de gran utilidad ante una botella de hemocultivo positivo hemolizada con tinción de Gram alterada o negativa. Ambas técnicas son rápidas, fiables, presentan un precio asequible y son fácilmente realizables en cualquier tipo de laboratorio de microbiología clínica.
