Sr. Editor:
La infección por Chlamydia trachomatis es un importante problema de salud pública y la principal causa de infecciones de transmisión sexual (ITS) en nuestro medio1,2. Las ITS por C. trachomatis son prevenibles y de fácil tratamiento, aunque debido al alto porcentaje de pacientes asintomáticos (del 50 al 70%) requieren un diagnóstico clinicomicrobiológico preciso y rápido para evitar la propagación de la infección y la aparición de posibles secuelas3,4. Las técnicas de amplificación de ácidos nucleicos han aumentado la sensibilidad del diagnóstico de esta infección5. Uno de los métodos comerciales más utilizados en Europa es el COBAS® TaqMan (Roche), que incluye un equipo de preparación manual de la muestra mediante lisis para exponer los ácidos nucleicos. El objetivo de este trabajo fue comparar este procedimiento manual con una extracción automatizada de ácidos nucleicos.
Entre diciembre de 2007 y marzo de 2008 se analizaron prospectivamente 200 muestras de 177 pacientes (63 varones y 114 mujeres) con una edad media de 31 años (rango de 15 a 68; mediana de 30). Se emplearon en paralelo 2 métodos de obtención de ácidos nucleicos según las instrucciones de cada fabricante: a) preparación manual mediante lisis con el equipo Amplicor CT/NG Specimen Preparation (Roche) y b) método automatizado con el equipo NucliSens en el robot EasyMAG (BioMérieux). La detección de C. trachomatis se efectuó mediante una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real basada en la amplificación del plásmido críptico con cebadores y sondas específicas (COBAS® TaqMan CT Test, Roche). La valoración se realizó con el analizador COBAS® TaqMan 48, que aporta los resultados cualitativos por cada muestra junto con un análisis semicuantitativo mediante una gráfica que indica la intensidad de fluorescencia en cada ciclo de amplificación. Para el análisis de los resultados se empleó el test de McNemar para datos pareados.
De las 200 muestras analizadas, se detectó C. trachomatis en 24 (12%): 8 exudados cervicales de mujeres, y 10 uretrales y 6 rectales de 15 varones (tabla 1). Con el método de preparación manual fueron positivas 17 (8,5%) muestras y con el método de extracción automatizada fueron positivas las 24 (12%) muestras, un 30% más. Siete muestras (3 de cérvix, 3 rectales y una uretral) tuvieron un resultado discordante: fueron positivas cuando la extracción de ácido desoxirribonucleico (ADN) se hizo con el método automático y fueron negativas cuando se efectuó la preparación manual (p=0,004). Todas las muestras que fueron positivas con el método manual lo fueron también con el automático.
Tabla 1. Detección de Chlamydia trachomatis en muestras pareadas con 2 métodos de obtención de ácidos nucleicos
| Muestras | n positivos (%) | ||||
| Total | Extracción automática | Preparación manual | Discordantes | ||
| Cérvix (n=113) | 8 (7,1) | 8 (7,1) | 5 (4,4) | 3 (2,7) | Z=1,732; p=0,042 |
| Uretral (n=65) | 10 (15,4) | 10 (15,4) | 9 (13,8) | 1 (1,5) | Z=0,5; p=0,31 |
| Rectal (n=17) | 6 (35,3) | 6 (35,3) | 3 (17,6) | 3 (17,6) | Z=1,732; p=0,042 |
| Otros (n=5) | 0 | 0 | 0 | 0 | – |
| Total (n=200) | 24 (12) | 24 (12) | 17 (8,5) | 7 (3,5) | Z=2,65; p=0,004 |
El análisis semicuantitativo mostró que en todas las muestras positivas por ambos métodos de obtención de ácidos nucleicos (manual y automático), la amplificación se inició siempre en uno o 2 ciclos anteriores en las muestras extraídas por el método automático, lo que indicó la obtención de un mayor número de copias de C. trachomatis. Asimismo, este análisis reveló que en las muestras con resultado discordante la carga bacteriana era baja, ya que en todas ellas la detección de la diana se produjo en los ciclos finales de amplificación. La confirmación mediante hibridación con sondas de los amplificados obtenidos que proporciona el sistema COBAS® TaqMan CT Test asegura la especificidad de los resultados. Los mejores resultados encontrados en este trabajo para el método automático de extracción se pueden explicar por la mayor sensibilidad en detectar las cargas bacterianas bajas. Este método realiza una lisis celular, tras la que los ácidos nucleicos liberados se atrapan en una matriz inmunomagnética de sílice, posteriormente se purifican y se obtiene un producto final concentrado6. Sin embargo, el sistema de preparación manual se basa en una lisis celular química y posterior exposición del ADN. La preparación manual es sencilla y dura media hora, pero la extracción automática optimiza el rendimiento del trabajo y requiere menor manipulación, lo que disminuye el riesgo de contaminación cruzada y permite mayor reproducibilidad.
El presente estudio está basado en un número pequeño de muestras y los resultados deben interpretarse como preliminares. Sin embargo, indican que un sistema de extracción automatizada de ácidos nucleicos podría mejorar el rendimiento de la técnica manual empleada actualmente en el equipo COBAS® TaqMan. Los resultados de otro estudio reciente apoyan esta misma hipótesis7. Si nuevos estudios reproducen los resultados de este trabajo, sería conveniente que el citado método de detección de C. trachomatis incorporara un sistema de extracción de ácidos nucleicos automatizado, avalado por el Marcado CE, lo que aportaría mejoras a la técnica actual.
Autor para correspondencia. luisdario.pineirovazquez@osakidetza.net
