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Vol. 25. Núm. 1.Enero - Febrero 2018
Páginas 1-72
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Vol. 25. Núm. 1.Enero - Febrero 2018
Páginas 1-72
DOI: 10.1016/j.circv.2017.12.016
Open Access
Utilidad de la secuenciación directa de tejido valvular en pacientes con endocarditis infecciosa en un hospital terciario: Experiencia inicial
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P. Falomir
Autor para correspondencia
patriciafalomirsalcedo@gmail.com

Autor para correspondencia.
, E. Ibáñez-Martínez, M.J. Castaño-Aroca, A.M. Bel-Mínguez, M. Blanes-Juliá, M.D. Gómez-Ruiz, J.L. López-Hontangas
Hospital Universitario y Politécnico La Fe, Valencia
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Tabla 1. Grupo de estudio
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Justificación: La endocarditis infecciosa (EI) es una enfermedad grave, de diagnóstico complejo y mortalidad elevada. La microbiología constituye el pilar fundamental del diagnóstico etiológico. En ocasiones, la microbiología clásica no permite identificar el microorganismo causal. Las técnicas de amplificación de ácidos nucleicos (TAAN) de secuenciación directa de tejido valvular de bacterias y hongos (PCR universal) pueden optimizar el diagnóstico etiológico.

Objetivo: Comprobar en nuestro centro la utilidad de la secuenciación directa de bacterias y hongos a partir de tejido valvular en el diagnóstico etiológico de la EI, comparando con un grupo control.

Método: De enero a junio de 2017 se recogieron muestras de válvulas de pacientes con EI (grupo estudio) y pacientes sin EI intervenidos por disfunción valvular (grupo control).

Se realizó el cultivo microbiológico habitual y las TAAN.

La extracción de ADN se realizó con el kit Virus/Pathogen Mini (QiaSymphony®, QIAGEN®). La PCR universal se realizó con los primers PSL y P13P (gen 16S rRNA de bacterias) y 18S-1 y 18S-2 (gen 18S rRNA de hongos). Se amplificó el gen de la β-globina humana (primers β-gloF y β-gloR) para detectar inhibiciones y fallos en la extracción. Los amplicones se purificaron (QIAquickPCR Purification kit QIAGEN®) y se realizó la PCR de secuenciación empleando los mismos primers que en la amplificación. El producto se precipitó (Agencourt®CleanSEQ®) y secuenció en el equipo GenomeLabTM Genetic Analysis System. Las secuencias obtenidas se cotejaron en la web de GenBank a través del software BLAST.

Resultados: Se recogieron 11 muestras de pacientes con EI sospechada o confirmada y un paciente con EI pasada (tabla 1).

Tabla 1.

Grupo de estudio

  Sexo  Edad  Muestra: Tejido  Detección PCR amplio espectro (% similitud)  Cultivo tejido válvula  Hemocultivo  Diagnóstico 
65  Válvula aórtica  Streptococcus anginosus 99%  Streptococcus anginosus  No tiene  EI Streptococcus anginosus 
58  Válvula aórtica  Staphylococcus aureus 100%  Negativo  Staphylococcus aureus  EI Staphylococcus aureus 
64  Válvula aórtica  Staphylococcus spp. 97%  Negativo  Staphylococcus epidermidis  EI Staphylococcus epidermidis 
60  Prótesis aórtica  Fusarium 100%  Fusarium solani Corynebacterium spp.  Negativo  EI Fusarium solani 
57  Prótesis aórtica  Propionibacterium acnes 99%  Negativo  Staphylococcus epidermidis  EI Staphylococcus epidermidis 
38  Válvula mitral  Haemophilus parainfuenza 99%  Haemophilus parainfluenzae  Negativo  EI Haemophilus parainfluenzae 
80  Válvula aórtica  Streptococcus spp. 95%  Negativo  Streptococcus bovis  EI Streptococcus bovis 
72  Prótesis aórtica  Candida parapsilosis  Candida parapsilosis  Candida parapsilosis  EI Candida parapsilosis 
35  Válvula aórtica  No se detecta  Negativo  Negativo  EI descartada 
10  65  Válvula mitral anterior  Streptococcus spp. 97%  Micrococcus luteus  Streptococcus grupo viridans  EI Streptococcus grupo viridans 
      Válvula mitral posterior  Streptococcus spp. 99%  Negativo     
11  71  Prótesis aórtica  Candida auris 99%  Candida auris  Candida auris, Staphylococcus haemolyticus  EI Candida auris 
12  63  Válvula mitral  Streptococcus spp. 88%  Kokuria palustris  No tiene  EI pasada Streptococcus sanguinis y Streptococcus mitis/oralis (tratada en 2015) 

En 11 de los 12 casos hubo concordancia con el diagnóstico microbiológico clásico. En el caso 12 (EI pasada) el cultivo de válvula se consideró contaminado, pero se detectó ADN de Streptococcus spp. (aunque con porcentaje bajo de similitud). En los casos 1, 4 y 6 (hemocultivo negativo o no recogido) las TAAN coincidieron con el cultivo del tejido, afianzando el diagnóstico etiológico. En 5 muestras se detectó ADN de Streptococcus spp., pero solo en una se llegó a la identificación de especie.

En el grupo control se recogieron 17 muestras. En 5 no amplificó el gen de la β-globina, lo que invalidó el resultado de las TAAN. En las otras 12 el resultado fue negativo. Respecto al cultivo, fue positivo en un caso (Staphylococcus epidermidis, considerado contaminación).

Conclusiones: Nuestra experiencia, todavía muy preliminar, concuerda con lo descrito en la literatura:

  • La secuenciación directa de tejido valvular presenta una elevada concordancia con el cultivo microbiológico clásico. Nos permite el diagnóstico etiológico cuando no se disponen de hemocultivos o son negativos.

  • La PCR del gen 16S es insuficiente para diferenciar Streptococcus spp. a nivel de especie.

  • En un caso hemos podido detectar ADN bacteriano tras años de un episodio de EI.

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