Regístrese
Buscar en
Revista del Laboratorio Clínico
Toda la web
Inicio Revista del Laboratorio Clínico Aplicación de la secuenciación masiva de nueva generación al diagnóstico mol...
Información de la revista
Vol. 8. Núm. 1.
Páginas 8-18 (Enero - Marzo 2015)
Compartir
Compartir
Descargar PDF
Más opciones de artículo
ePub
Visitas
789
Vol. 8. Núm. 1.
Páginas 8-18 (Enero - Marzo 2015)
ORIGINAL
DOI: 10.1016/j.labcli.2015.02.001
Aplicación de la secuenciación masiva de nueva generación al diagnóstico molecular de la hipercolesterolemia familiar
Applicability of next generation sequencing to the molecular diagnosis of familial hypercholesterolemia
Visitas
789
Estefanía Martínez-Barriosa, Ana Isabel Martínez-Pucholb, Alba Roseta, Daniel Zambónc, Joan Clàriaa,b,d, Montserrat Bernata,
Autor para correspondencia
mbernat@clinic.ub.es

Autor para correspondencia.
a Servicio de Bioquímica y Genética Molecular, Centro de Diagnóstico Biomédico, Hospital Clínic, Barcelona, España
b Institut d’Investigacions Biomèdiques, August Pi i Sunyer (IDIBAPS), Barcelona, España
c Unidad de Lípidos, Servicio de Endocrinología, Hospital Clínic, Barcelona, España
d Departamento de Ciencias Fisiológicas I, Facultad de Medicina, Universitat de Barcelona, Barcelona, España
Este artículo ha recibido
789
Visitas
Información del artículo
Resumen
Texto completo
Bibliografía
Descargar PDF
Estadísticas
Figuras (4)
Mostrar másMostrar menos
Tablas (6)
Tabla 1. Criterios diagnósticos para la hipercolesterolemia familiar basados en la red de clínicas de lípidos holandesas
Tabla 2. Parámetros de control de calidad de la carrera de secuenciación establecidos por Progenika
Tabla 3. Variantes encontradas en el estudio, previamente identificadas como patogénicas y su clasificación mutacional
Tabla 4. Flujo de trabajo de la NGS y tiempo en horas invertido en promedio en cada paso del proceso de una carrera de secuenciación utilizando el ultrasecuenciador GS Junior 454 de Roche
Tabla 5. Flujo de trabajo de la secuenciación Sanger y tiempo en horas invertido en promedio en cada paso del proceso utilizando el analizador automático ABI 3130xl de Applied Biosystems (16 capilares, placa de 96)
Tabla 6. Tiempo estimado según la metodología aplicada, para la secuenciación de los genes implicados en la HF (gen LDLR: 18 exones, gen APOB 2/26 exones, gen PCSK9: 12 exones y gen LDLRAP1: 9 exones, en total 41 exones por muestra)
Mostrar másMostrar menos
Resumen
Introducción

La hipercolesterolemia familiar es una enfermedad autosómica dominante que cursa con niveles plasmáticos elevados de colesterol unido a lipoproteínas de baja densidad. La presencia de esta alteración en el metabolismo lipídico se asocia a un aumento del riesgo cardiovascular en los pacientes que la padecen, siendo de gran importancia la realización de un diagnóstico genético para ofrecer un tratamiento adecuado y disminuir la morbimortalidad. El objetivo de este trabajo es describir la aplicación de la secuenciación de nueva generación al diagnóstico genético de la hipercolesterolemia familiar, en comparación con la secuenciación Sanger, la técnica convencional usada hasta el momento.

Material y métodos

Se analizaron 110 muestras de sangre venosa periférica procedente de pacientes que presentaban cuadro clínico de hipercolesterolemia familiar mediante secuenciación de nueva generación, utilizando un panel comercial que permite la identificación de mutaciones en los genes LDLR, APOB, PCSK9 y LDLRAP1 (SEQPRO Lipo, Progenika) con la tecnología GS JUNIOR 454 (Roche).

Resultados

Aplicando esta tecnología fue posible secuenciar los genes asociados a la hipercolesterolemia familiar descritos hasta el momento en grupos de hasta 20 pacientes simultáneamente. Se detectaron un total de 35 mutaciones en las 110 muestras analizadas, localizándose el 94,29% en el gen LDLR. Todas las mutaciones identificadas fueron confirmadas mediante el método de secuenciación Sanger.

Conclusiones

La utilización de la secuenciación masiva de nueva generación permite la realización de un diagnóstico genético más rápido y un análisis molecular más eficiente de los genes implicados en la hipercolesterolemia familiar con una fiabilidad similar a la técnica convencional Sanger.

Palabras clave:
Secuenciación de nueva generación
Secuenciación Sanger
Diagnóstico molecular
Hipercolesterolemia familiar
Abstract
Introduction

Familial hypercholesterolemia is an autosomal dominant disorder that causes increased levels of cholesterol associated with low density lipoproteins in plasma. The presence of altered lipid metabolism in these patients increases their level of risk of suffering from a cardiovascular disease. The certainty of having this genetic disorder by making a timely and precise molecular diagnostic is crucial for the appropriate treatment and the reduction of the disease morbidity-mortality. The aim of this work is to describe the applicability of next generation sequencing technology to the genetic diagnosis of familial hypercholesterolemia and compare this novel method with the conventional Sanger sequencing method.

Material and methods

A next generation sequencing commercial panel (SEQPRO Lipo, Progenika) was used to analyze 110 peripheral venous blood samples from patients with familial hypercholesterolemia. This enables the assessment of mutations in genes associated with the disease (e.g. LDLR, APOB, PCSK9 and LDLRAP1) with the GS JUNIOR 454 technology (Roche).

Results

Application of next generation sequencing enables the sequencing of the genes involved in the familial hypercholesterolemias, described so far, in groups of 20 patients simultaneously. Using this novel technology, a total of 35 mutations were detected in the 110 analysed samples, with 94.29% being located in the LDLR gene. Mutations were confirmed by Sanger sequencing.

Conclusion

Next generation sequencing enables a quick genetic diagnosis and a more efficient molecular analysis of all genes described so far to be involved in familial hypercholesterolemia, with similar reliability to that of conventional Sanger sequencing.

Keywords:
Next generation sequencing
Sanger sequencing
Molecular diagnostic
Familial hypercholesterolemia

Artículo

Opciones para acceder a los textos completos de la publicación Revista del Laboratorio Clínico
Suscriptor
Suscriptor de la revista

Si ya tiene sus datos de acceso, clique aquí.

Si olvidó su clave de acceso puede recuperarla clicando aquí y seleccionando la opción "He olvidado mi contraseña".
Suscribirse
Suscribirse a:

Revista del Laboratorio Clínico

Comprar
Comprar acceso al artículo

Comprando el artículo el PDF del mismo podrá ser descargado

Precio 22,50 €

Comprar ahora
Contactar
Teléfono para suscripciones e incidencias
De lunes a viernes de 9h a 18h (GMT+1) excepto los meses de julio y agosto que será de 9 a 15h
Llamadas desde España
932 415 960
Llamadas desde fuera de España
+34 932 415 960
E-mail
Opciones de artículo
Herramientas
es en pt

¿Es usted profesional sanitario apto para prescribir o dispensar medicamentos?

Are you a health professional able to prescribe or dispense drugs?

Você é um profissional de saúde habilitado a prescrever ou dispensar medicamentos

es en pt
Política de cookies Cookies policy Política de cookies
Utilizamos cookies propias y de terceros para mejorar nuestros servicios y mostrarle publicidad relacionada con sus preferencias mediante el análisis de sus hábitos de navegación. Si continua navegando, consideramos que acepta su uso. Puede cambiar la configuración u obtener más información aquí. To improve our services and products, we use "cookies" (own or third parties authorized) to show advertising related to client preferences through the analyses of navigation customer behavior. Continuing navigation will be considered as acceptance of this use. You can change the settings or obtain more information by clicking here. Utilizamos cookies próprios e de terceiros para melhorar nossos serviços e mostrar publicidade relacionada às suas preferências, analisando seus hábitos de navegação. Se continuar a navegar, consideramos que aceita o seu uso. Você pode alterar a configuração ou obter mais informações aqui.