Implementing CLIA for QuantiFERON®-CMV testing: Optimizing cellular immune response against cytomegalovirus

Abstract

Introduction

Cytomegalovirus (CMV) remains a significant infectious complication in solid organ transplant recipients. Assessing cellular immunity through interferon-gamma (IFN-γ) release assays, such as QuantiFERON®-CMV (QTF-CMV), is useful for guiding prophylactic and therapeutic decisions. Although ELISA is the validated method for QTF-CMV, chemiluminescence immunoassay (CLIA) may offer technical advantages. This study aimed to evaluate the performance of the CLIA-based LIAISON® QuantiFERON®-TB Gold Plus assay in quantifying IFN-γ in QTF-CMV testing, compared to the ELISA-based QuantiFERON®-CMV assay.

Methods

A retrospective study was conducted on 169 stored plasma samples from 85 lung transplant recipients. IFN-γ was quantified using both ELISA (Qiagen®) and CLIA (DiaSorin®). Specific (CMV-NIL) and nonspecific (MIT-NIL) responses were compared using Pearson and Lin's concordance correlation coefficients, Bland–Altman analysis, and ROC curves. Diagnostic agreement was assessed using the Kappa index, sensitivity, specificity, and agreement rates.

Results

CLIA yielded significantly higher IFN-γ values than ELISA for CMV-NIL (+0.41 IU/mL) and MIT-NIL (+0.33 IU/mL). Strong correlation and concordance were observed (r and ρ_c >0.93). Diagnostic agreement reached 95.86% (Kappa = 0.913), with fewer indeterminate results in CLIA (3.55% vs 4.73%). The optimal CLIA cut-off was 0.2754 IU/mL, achieving 100% sensitivity and specificity compared to ELISA.

Conclusions

CLIA shows excellent agreement with ELISA in QTF-CMV testing and is a reliable and automatable alternative. Its implementation may improve laboratory workflows. Adjusting the cut-off is recommended for optimal diagnostic accuracy.

Resumen

Introducción

El citomegalovirus (CMV) representa una complicación infecciosa relevante en receptores de trasplante de órgano sólido. La evaluación de la inmunidad celular mediante ensayos de liberación de interferón-gamma (IFN-γ), como QuantiFERON®-CMV (QTF-CMV), es útil para guiar decisiones clínicas. En la actualidad, ELISA es el método validado para esta prueba, aunque el inmunoensayo por quimioluminiscencia (CLIA) podría ofrecer ventajas técnicas. El objetivo de este estudio fue evaluar el rendimiento del método CLIA (LIAISON® QuantiFERON®-TB Gold Plus, DiaSorin®) para la cuantificación de IFN-γ en el contexto del ensayo QTF-CMV, en comparación con el método ELISA (Qiagen®).

Métodos

Se realizó un estudio retrospectivo con 169 muestras de plasma almacenadas de 85 receptores de trasplante pulmonar. Se cuantificó el IFN-γ mediante ambos métodos. Se compararon los resultados específicos (CMV-NIL) e inespecíficos (MIT-NIL) mediante los coeficientes de Pearson y de concordancia de Lin, análisis de Bland-Altman, curvas ROC y se evaluó la concordancia diagnóstica con el índice Kappa, sensibilidad y especificidad.

Resultados

CLIA proporcionó valores significativamente más altos de IFN-γ que ELISA para CMV-NIL (+0,41 UI/mL) y MIT-NIL (+0,33 UI/mL). Se observó una fuerte correlación y concordancia (r y ρc > 0,93). La concordancia diagnóstica fue del 95,86% (Kappa = 0,913), con menor tasa de resultados indeterminados en CLIA. El punto de corte óptimo fue 0,2754 UI/mL, con 100% de sensibilidad y especificidad frente a ELISA.

Conclusiones

CLIA muestra una excelente concordancia con ELISA en QTF-CMV, siendo una alternativa fiable y automatizable. Se recomienda ajustar el punto de corte para mejorar la precisión diagnóstica.