MiR-153-3p reduces extracellular matrix accumulation in high glucose-stimulated human glomerular mesangial cells via targeting PAQR3 in diabetic nephropathy

Abstract

Introduction

This study aims to explore the effect and related molecular mechanism of miR-153-3p on high glucose-stimulated human glomerular mesangial cells.

Materials and methods

The quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) assay was employed to check miR-153-3p and PAQR3 expression levels in diabetic nephropathy patients. (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) MTT assay was applied to investigate the effects of miR-153-3p transfection or PAQR3 administration on mesangial cell (MC) activity. ELISA assays were used to check the expression levels of extracellular matrix (ECM) related proteins. The bioinformatics method and dual-luciferase reporter assay were employed together to anticipate and check the targeting relationship between miR-153-3p and PAQR3. Western blot assays were applied to check the PAQR3, PI3K and AKT expression after miR-153-3p transfection or PAQR3 administration.

Results

The expression level of miR-153-3p was lower in diabetic nephropathy patients, while the expression of PAQR3 was concomitantly higher. Upregulation of miR-153-3p can reduce MC proliferation and ECM accumulation. Further research indicated that miR-153-3p directly regulated PAQR3 expression via coupling with the 3’-UTR of PAQR3. Finally, the fact that miR-153-3p regulates the PI3K/AKT pathway by PAQR3 was confirmed.

Conclusion

MiR-153-3p regulates the PI3K/AKT pathway through PAQR3, thereby playing a role in regulating cell proliferation and ECM accumulation in high glucose-stimulated MCs.

Resumen

Introducción

El presente estudio tiene como objetivo analizar el efecto y el mecanismo molecular relacionado de miR-153-3p en células mesangiales glomerulares (CM) humanas estimuladas con glucosa alta.

Materiales y métodos

Se empleó el ensayo cuantitativo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR) para comprobar los niveles de expresión de miR-153-3p y PAQR3 en pacientes con nefropatía diabética. Se aplicó el ensayo MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) para investigar los efectos de la transfección de miR-153-3p o la administración de PAQR3 en la actividad de las CM. Se utilizaron ensayos ELISA para comprobar los niveles de expresión de las proteínas relacionadas con la matriz extracelular (MEC). Se emplearon conjuntamente un método bioinformático y un ensayo indicador de luciferasa dual para prever y verificar la relación de focalización entre miR-153-3p y PAQR3. Se aplicaron ensayos de Western blot para comprobar la expresión de PAQR3, PI3K y AKT tras la transfección de miR-153-3p o la administración de PAQR3.

Resultados

el nivel de expresión de miR-153-3p fue menor en los pacientes con nefropatía diabética, mientras que la expresión de PAQR3 fue simultáneamente mayor. El aumento de miR-153-3p puede reducir la proliferación de CM y la acumulación de MEC. Otras investigaciones indicaron que miR-153-3p regulaba directamente la expresión de PAQR3 a través del acoplamiento con la 3’-UTR de PAQR3. Por último, se confirmó el hecho de que miR-153-3p regula la vía PI3K/AKT mediante PAQR3.

Conclusión

MiR-153-3p regula la vía PI3K/AKT a través de PAQR3, por lo que desempeña una función en la regulación de la proliferación celular y la acumulación de MEC en CM estimuladas con glucosa alta.