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Vol. 17. Núm. 2.
Páginas 55-61 (Julio - Diciembre 2016)
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Vol. 17. Núm. 2.
Páginas 55-61 (Julio - Diciembre 2016)
Artículo especial
DOI: 10.1016/j.vacun.2016.08.004
Desarrollo de un ensayo de PCR para detectar los genes codificadores de la toxina del cólera (ctxAB) en preparaciones del candidato vacunal vivo atenuado CV638
Development of a PCR assay to detect the cholera toxin genes (ctxAB) in preparations of the living vaccine candidate attenuated CV638
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H. Peidro-Guzmán
Autor para correspondencia
heidy.peidro@cnic.edu.cu

Autor para correspondencia.
, K. Marrero-Domínguez, T. Ledón-Pérez, R. Fando-Calzada
Departamento de Biología Molecular, Área Enfermedades Infecciosas, Centro Nacional de Investigaciones Científicas, CNIC, La Habana, Cuba
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Tabla 1. Número de unidades formadoras de colonias de la cepa toxigénica V. cholerae C7258Kn en las diluciones empleadas para contaminar las preparaciones vacunales
Resumen

El candidato vacunal vivo oral atenuado CV638 se produce siguiendo los criterios de las guías de buenas prácticas de producción específicas para vacunas. El ingrediente activo de este candidato vacunal es la cepa atenuada genéticamente Vibrio cholerae (V. cholerae) 638, desarrollada por investigadores del Centro Nacional de Investigaciones Científicas de Cuba (CNIC), a partir de la cepa toxigénica de V. cholerae de serogrupo O1, biotipo El Tor C7258, mediante la remoción de los genes que codifican la producción de la toxina del cólera (ctxAB). Dado que la cepa 638 carece de estos genes en su genoma, la presencia de ctxAB en las preparaciones vacunales estaría dada por una contaminación con una cepa toxigénica de V. cholerae. El presente estudio tuvo como objetivo desarrollar una PCR específica para detectar los genes ctxAB a partir de ADN aislado de preparaciones del candidato vacunal CV638 contaminado artificialmente con V. cholerae toxigénico. La sensibilidad del ensayo de PCR empleando como molde ADN de la cepa toxigénica fue de un picogramo (pg) de ADN genómico por reacción, correspondiente a aproximadamente 200 copias del genoma de la bacteria. La sensibilidad del método de PCR para detectar cepas toxigénicas en preparaciones vacunales de la cepa 638, contaminadas con una cepa toxigénica, fue de ∼7×103 unidades formadoras de colonia (UFC) de la cepa toxigénica por dosis del candidato vacunal CV638. Este método, una vez validado, podría emplearse en el control de la calidad de la producción del candidato vacunal vivo CV638.

Palabras clave:
Candidato vacunal vivo V. cholerae 638
Toxina del cólera
Control de calidad
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Abstract

The live oral vaccine candidate against cholera CV638 is produced under good manufacturer practices. The active ingredient of this vaccine candidate is the genetically modified strain Vibrio cholerae (V. cholerae) 638, developed by researchers at the National Center of Scientific Research, from the strain V. cholerae serogroup O1 biotype El Tor C7258, by removing the cholera toxin genes (ctxAB). Since the strain 638 lacks these genes in its genome, the presence of ctxAB in vaccine preparations, would be given by a contamination with a toxigenic V. cholerae strain. The present study was aimed at designing a specific PCR to detect ctxAB genes in DNA isolated from preparations of the vaccine candidate CV638, artificially contaminated with toxigenic V. cholerae strain. The sensitivity of the optimized PCR assay was 1 pg of genomic DNA from toxigenic strain of V. cholerae C7258, corresponding to approximately 200 genomic copies. The sensitivity of the PCR method for detecting toxigenic strains in CV638 vaccine preparations contaminated with a toxigenic strain was ∼7×103 colony forming units of the toxigenic strain per dose of CV638. Once validated, this method could be used in the quality control of the production of the live vaccine candidate CV638.

Keywords:
Live vaccine candidate V. cholerae 638
Cholera toxin
Quality control
Polymerase Chain Reaction (PCR)

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