Utilidad de la citometría de flujo en la determinación de microagregados plaquetarios en pacientes con stent tratados con clopidogrel

Resumen

Introducción

La monitorización de pacientes con síndrome coronario agudo (SCA) con stent cardíaco, tratados con clopidogrel resulta conveniente, dada la frecuencia con que dichos pacientes no responden adecuadamente al tratamiento. En efecto, según nuestra experiencia, aproximadamente un 30% de casos pueden clasificarse como pacientes no respondedores (NR). No está establecido si pacientes NR presentan, como factor de riesgo, mayor número de microagregados plaquetarios (MAP) que los pacientes respondedores (R). La formación de MAP puede afectar a la microcirculación y es un factor de riesgo de formación de trombos mayores, por lo que su estudio puede resultar de gran interés.

Material y métodos

Se han valorado 78 pacientes consecutivos con un stent cardíaco implantado. El tratamiento consiste en un bolo inicial de 300 mg de clopidogrel, seguido de una dosis diaria de clopidogrel (75 mg) y ácido acetilsalicílico (100 mg). Aproximadamente 1 semana después de iniciado el tratamiento, se determina, mediante citometría de flujo (EPICS-XL, Beckman-Coulter, Izasa), el número MAP circulantes y los formados ex vivo por acción del ADP 2,5 μM. Para ello, con voluntarios sanos, se selecciona previamente la población plaquetaria, en función del forward y side scatter y por ser eventos CD61-positivos. En esta región se elige la subpoblación que ocupa el 5% superior, en la que, por definición, se encuentran los MAP. Una vez establecido el protocolo de adquisición de datos, se analizan las muestras problema. Los pacientes se clasifican como respondedores o no, en función de la exposición de CD62 plaquetaria inducida por acción de ADP 2,5 μM.

Resultados

El conjunto de 78 pacientes presenta mayor número de MAP circulantes que los controles (167±58/5.000 plaquetas frente a 113±56/5.000 plaquetas; p<0,001). El incremento en el número de MAP por acción de ADP es similar en los 50 controles y en los 51 pacientes que responden adecuadamente al tratamiento. Los 27 pacientes NR presentan mayor respuesta al ADP que los pacientes R, con un incremento en el número de MAP de 251±75/5.000 plaquetas, significativamente mayor que en los pacientes R (196±67/5.000 plaquetas; p<0,001).

Conclusiones

La técnica propuesta posibilita la detección de MAP formados espontáneamente y por acción del ADP, lo que permite monitorizar el tratamiento antiplaquetario en los pacientes SCA con stent implantado.

Abstract

Introduction

It is not well established whether non-responder patients(NR) to clopidogrel show, as a risk factor, higher number of platelet microaggregates (PMAs) than responder patients (R). These MAPs can affect the microcirculation and is a risk factor to forming larger thrombi, therefore the present study is interesting from this point of view.

Material and methods

Seventy-eight acute coronary syndrome (ACS) patients (78% male, aged 62.8±12.23 years) were included in this study. These patients underwent coronary stent implantation and treated with routine medication (clopidogrel 75 mg/day and aspirin 100 mg/day), after a loading bolus of 300 mg clopidogrel. The control group was made up of 50 healthy volunteers matched for age and gender who had not been given any pharmacological treatment. Using whole blood flow cytometry, ADP-stimulated and circulating platelet CD62 expression and platelet microaggregates was determined in the entire study population. After a week of treatment the number of circulating platelet microaggregates was evaluated by flow cytometry (EPICS-XL, Beckman-Coulter, Izasa), and the number of MAPs formed ex vivo by ADP 2.5 μM activation was also evaluated . With this aim, using healthy individuals, the platelet population was selected by their forward and side scatter values and as CD61-positive events. The subpopulation that occupied the upper 5% in this region where MAPs are detected,was chosen. After the analytical conditions were established, samples were analyzed. Patients were responders, or not, depending on the CD62 expression after being activated with ADP 2.5 μM.

Results

Seventy-eight patients showed a higher number of circulating MAPs than controls (177±75/5000 platelets vs. 121±62/5000 platelets; P<0.001). The increase in the MAPs number by ADP activation is higher in the 50 controls than in the 51 responder patients (79±45% vs. 23±18%; P<0.001). The 27 NR patients reacted to ADP in a similar way than controls, with a increase in the number of MAPs of 62±43%, significantly higher than in R (P<0.001). The findings of this study demonstrate the beneficial effects of clopidogrel in reducing platelet reactivity in 66% of the study patients. These results demonstrate the wide inter-individual variability in ADP response in patients treated with clopidogrel and imply that individualized monitoring of this type of patient is advisable.

Conclusions

The method described enables us to explore platelet microaggregates formation and may be of great help in monitoring clopidogrel efficacy in ACS patients with stent.