Determinación de ácido etilendiaminotetraacético por espectrometría de masas en tándem en muestras de sangre impregnadas en papel. Utilidad en la medida de tirotropina para cribado neonatal de hipotiroidismo congénito

Resumen

Introducción

Los programas para cribado neonatal utilizan muestras de sangre impregnada en papel, en ellas se determinan los marcadores de las patologías incluidas. La presencia de anticoagulantes en las muestras puede producir interferencias en los métodos de medida y se recomienda su no utilización. No es posible reconocer las muestras recogidas con anticoagulante.

Material y métodos

Se desarrolló y optimizó un procedimiento por espectrometría de masas en tándem con electrospray (ESI-MS/MS) para la determinación de EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) en las muestras de sangre en papel y se valoró su inclusión en el perfil de aminoácidos y acilcarnitinas utilizado para la detección precoz neonatal de enfermedades metabólicas. Se estudió su influencia sobre las medidas de tirotropina (TSH), realizadas para el cribado neonatal de hipotiroidismo congénito.

Resultados

Se optimizaron los parámetros que permiten la medida de EDTA en el eluato de sangre. Se ha determinado TSH en sangre en papel, suero y plasma de un grupo de 110 muestras y EDTA en otro grupo de 2.300 muestras provenientes del programa de cribado neonatal detectando su presencia en un 0,74% de las mismas.

Conclusiones

El método desarrollado es válido para la determinación de este anticoagulante y se puede incluir en el perfil de aminoácidos y acilcarnitinas por MS/MS para detectar aquellas muestras que se extrajeron inadecuadamente.

Se ha confirmado la influencia negativa del EDTA en la determinación de TSH mediante un fluoroinmunoensayo (AutoDELFIA^®). Esto podría provocar un falso negativo en el cribado neonatal de hipotiroidismo congénito.

Abstract

Introduction

Newborn screening programs use blood impregnated paper to analyze disease markers. The presence of EDTA in samples may interfere in the analytical methods used to measure these markers. For this reason, it is recommended not use anticoagulants in these samples. Moreover, it is not possible to recognize samples that have been collected into EDTA.

Material and Methods

We developed and optimized an electrospray tandem mass spectrometry (ES-MS/MS) method to determine EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) in dried blood spots (DBS) on paper. We also included the method in the amino acids and acylcarnitines profile used for metabolic diseases neonatal screening. We also studied the EDTA influence on thyrotropin (TSH) neonatal screening analysis.

Results

Optimized parameters for EDTA analysis in the blood eluate were found. TSH analysis was performed on DBS, serum and plasma samples from 110 patients. EDTA analysis on 2000 neonatal screening samples detected 0.74% of cases with EDTA contamination.

Conclusions

The developed method is valid for the determination of this blood anticoagulant and can be included in the profile of amino acids and acylcarnitines by MS / MS to detect those samples that were taken improperly.

The negative influence of EDTA in the determination of TSH by fluoroimmunoassay (AutoDELFIA^®) has been confirmed. This could cause a false negative in neonatal screening for congenital hypothyroidism.