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Vol. 2. Núm. 3.
Páginas 107-114 (Julio - Septiembre 2009)
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Vol. 2. Núm. 3.
Páginas 107-114 (Julio - Septiembre 2009)
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Aplicación de un panel de metilación para el diagnóstico de cáncer de pulmón en broncoaspirados. Resultados preliminares
Application of a methylation panel for the diagnosis of lung cancer in bronchoaspirates. Preliminary results
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J.. Jesús Méndez-Gonzáleza,
Autor para correspondencia
Jmendez@santpau.cat

Autor para correspondencia.
, Marc Gallegos-Marmolejob,, Susana Martínez-Figueroaa, Assumpta Antonijuan-Parésa, Silvia Martínez-Couseloa, Josefina Mora-Bruguésa
a Servei de Bioquímica Clínica, Hospital de la Santa Creu i Sant Pau, Barcelona, España
b Laboratori de Recerca Translacional, Institut Català de Oncología, Hospitalet de Llobregat, Barcelona, España
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Tablas (4)
Tabla 1. Frecuencia de metilación en los broncoaspirados de cada uno de los tipos de tumores estudiados y en muestras libres de cáncer de pulmón
Tabla 2. Frecuencia de metilación en cada uno de los diferentes estadios tumorales estudiados
Tabla 3. Secuencias de los cebadores correspondientes a cada una de las reacciones, temperatura de annealing y longitud del fragmento correspondiente
Tabla 4. Número de citologías sospechosas o discordantes con el diagnóstico final y contribución al diagnóstico correcto al emplear el panel de metilación
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Resumen
Introducción

La metilación del ácido desoxirribonucleico (ADN) es una rama de la epigenética que puede ser útil para la identificación, incluso precoz, del cáncer de pulmón. El objetivo del estudio fue evaluar la sensibilidad, especificidad y rendimiento diagnóstico de un panel de metilación formado por los genes APC (adenomatous polyposis coli), DAPK (death associated protein kinase) y RASSF1A (Ras association domain familiy 1A) asociado a la citología habitual en broncoaspirados (BAS) de pacientes con sospecha de cáncer de pulmón.

Material y métodos

Se seleccionaron 39 BAS, 24 positivos y 15 negativos, para cáncer de pulmón de diferentes tipos y estadios. Las citosinas de las muestras se transformaron en uracilos con bisulfito sódico, se efectuó una doble reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (bisulfite conversion specific-methylation specific PCR) y se identificó el estado de metilación mediante electroforesis.

Resultados

APC resultó metilado en 2 de los 24 tumores pulmonares (8%), DAPK en 0 de 24 (0%) y RASSF1A en 9 de 23 (39%). La sensibilidad total del panel fue del 37,5% (9 de 24). No se detectó metilación en ninguna de las muestras libres de cáncer de pulmón (0 de 15), por lo que la especificidad fue del 100%. Además, el panel detectó metilación en una de las 7 muestras de cáncer primario de pulmón, cuya prueba citológica había sido negativa (14%) y en 3 de las 5 muestras con cáncer de pulmón con citologías meramente sospechosas (60%). Su contribución al diagnóstico correcto ante pruebas citológicas sospechosas o discordantes con el diagnóstico final fue del 33% (4 de 12).

Conclusiones

La metilación del ADN puede ser un arma útil en el diagnóstico del cáncer de pulmón. Hasta el momento, la sensibilidad en el panel escogido depende exclusivamente de RASSF1A. Nuevos estudios son necesarios para garantizar la reproducibilidad y optimizar su sensibilidad.

Palabras clave:
Metilación
Cáncer de pulmón
Broncoaspirado
Sensibilidad
Especificidad
Abstract
Introduction

DNA methylation is a part of epigenetics that can be useful for lung cancer detection even at early stages. The aim of this study was to evaluate sensitivity, specificity and diagnostic capacity of a methylation panel including APC, DAPK and RASSF1A genes, together with routine cytology tests in patients suspected with lung cancer.

Material and methods

We selected 39 bronchoaspirates, 24 positive and 15 negative for lung cancer of different histological types and stages. Samples were transformed with sodium bisulphite. A double PCR (BS-MSP) was performed and methylation status was identified by electrophoresis.

Results

APC was found to be methylated in 2 out of 24 lung tumours (8%), DAPK in 0 out of 24 (0%) and RASSF1A in 9 out of 23 (39%). Panel sensibility was 37.5% (9/24). No methylation was detected in any of the negative lung cancer samples (0/15), so specificity was 100%. Moreover, the panel detected methylation in 1 of the 7 primary lung cancer tumour samples in which the cytology test was negative (14%) and in 3 of 5 lung cancer tumour samples in which cytology test was only suspicious (60%). Its contribution to the correct diagnosis when cytology tests were suspicious or discordant with final diagnosis was 33% (4/12).

Conclusions

DNA methylation can be a useful tool in lung cancer diagnosis. The chosen panel sensibility depends exclusively on RASSF1A to date. Consequently, new studies are required to guarantee reproducibility and optimize sensitivity.

Keywords:
Methylation
Lung cancer
Bronchoaspirates
Sensitivity
Specificity

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