Caracterización citogenética molecular de las células germinales masculinas en la azoospermia secretora: parada de la maduración

Cerca de una tercera parte de los pacientes con azoospermia no obstructiva presentan parada de la maduración (MA, maturation arrest). Queda por evaluar por qué algunos casos exhiben unas pocas células germinales que escapan al bloqueo meiótico y forman espermatozoides (MA incompleta) mientras otros presentan una MA completa en la meiosis (MA completa). En este estudio comparamos ambas situaciones por hibridación in situ fluorescente (FISH) de los cromosomas sexuales (X, Y) y autosómicos (7, 18) en poblaciones puras de los distintos estadios de células germinales. Se aislaron por micromanipulación células de Sertoli, espermatocitos primarios, espermatocitos secundarios, espermátidas redondas y elongadas de biopsias en fresco de 7 pacientes con azoospermia obstructiva (controles) y 20 pacientes con MA (9 MA completa, 11 MA incompleta). En todos los casos, los pacientes presentaron cariotipo y desarrollo de los caracteres sexuales secundarios normales, ausencia de endocrinopatías y microdeleciones en Yq11.2. La MA incompleta se caracterizó por cifras incrementadas de aneuploidías en las células de Sertoli, disminución en el emparejamiento de los cromosomas homólogos en la meiosis I y una incidencia incrementada de aneuploidías en los espermatocitos secundarios, sugiriendo que puede ser debido a deficiencias en el ensamblaje del complejo sinaptonémico. Por el contrario, la MA completa se asoció con cifras incrementadas de aneuploidías en los espermatocitos primarios, originadas en las divisiones mitóticas de la espermatogonia, y emparejamiento normal, sugiriendo que la MA meiótica puede ser debida a deficiencias en el sistema de reparación del ADN.

Characterization of male germ cells in secretory azoospermia by molecular cytology: maturation arrest About one third of non-obstructive azoospermic cases are due to maturation arrest (MA). The question of why some cases have a few germ cells that escape the meiotic block and form spermatozoa (incomplete MA) whereas others completely arrest at meiosis (complete MA) remains to be determined. In the present study we compared both situations through FISH analysis of sex (X, Y) and autosomal (7, 18) chromosomes in pure populations of stage-specific germ cells. Sertoli cells, primary spermatocytes, secondary spermatocytes, round spermatids and elongated spermatids were isolated by micromanipulation from fresh testicular biopsies of 7 patients with obstructive azoospermia (controls) and 20 patients with MA (9 complete MA, 11 incomplete MA). All the patients had normal secondary sexual development and karyotypes, and absence of endocrine disorders and Yq11.2 microdeletions. Incomplete MA was characterized by increased levels of aneuploidy in Sertoli cells, decreased homologue pairing at meiosis I and an increased incidence of aneuploidy in secondary spermatocytes, thus suggesting that it may be caused by deficiencies in synaptonemal complex assembly. In contrast, complete MA was associated with increased levels of aneuploidy in primary spermatocytes, arising during mitotic divisions of spermatogonia, and normal pairing, thus suggesting that meiotic arrest might be due to deficiencies in mismatch DNA repair.