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Vol. 43. Núm. 3.
Páginas 107-116 (Marzo 2020)
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Vol. 43. Núm. 3.
Páginas 107-116 (Marzo 2020)
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DOI: 10.1016/j.gastrohep.2019.02.006
Inhibition of Frizzled-2 by small interfering RNA protects rat hepatic BRL-3A cells against cytotoxicity and apoptosis induced by Hypoxia/Reoxygenation
La inhibición de Frizzled-2 por ARN interferente pequeño protege a los hepatocitos BRL-3A de rata frente a la citotoxicidad y la apoptosis inducidas por hipoxia/reoxigenación
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Xiang Hua,b, Chenjie Zhoua, Guolin Hea, Yuan Chenga, Mingxin Pana, Yi Gaoa,
Autor para correspondencia
drgaoy@126.com

Corresponding author.
a Department of Hepatobiliary Surgery II, State Key Laboratory of Organ Failure Research, Guangdong Provincial Research Center for Artificial Organ and Tissue Engineering, Guangzhou Clinical Research and Transformation Center for Artificial Liver, Institute of Regenerative Medicine, Zhujiang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510280, Guangdong Province, China
b General Surgery Department, The Second Hospital of Shenzhen Baoan People's Hospital Group, Shenzhen 518108, Guangdong Province, China
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Abstract

Frizzled-2 plays an important role in maintaining normal hepatic cell functionality. This study aimed to investigate the role of inhibition of Frizzled-2 in protecting rat liver BRL-3A cells from Hypoxia/Reoxygenation (H/R). In vitro H/R hepatic cell model was established by culturing BRL-3A cells under H/R condition. Frizzled-2 siRNA was transfected into BRL-3A cells to inhibit Frizzled-2 signaling. Wnt5a and Frizzled-2 were significantly increased in BRL-3A cells upon H/R treatment. H/R treatment induced cell cytotoxicity, the early apoptosis rate and the intracellular Ca2+ level in BRL-3A cells while silencing frizzled-2 gene decreased the H/R induced cell cytotoxicity, apoptosis and intracellular Ca2+ level. In vivo mice study further showed the up-regulation of Frizzled-2/Wnt 5 pathway and cleaved Caspase-3 expression in liver tissues under ischemia and reperfusion injury (IRI). In summary, inhibition of Frizzled-2 by its siRNA may protects BRL-3A cells by attenuating the H/R induced cell cytotoxicity and apoptosis.

Keywords:
Frizzled-2
siRNA
Hypoxia/Reoxygenation (H/R)
Apoptosis
Intracellular Ca2+
Hepatic BRL-3A cells
In vivo mice study
Resumen

Frizzled-2 desempeña un papel importante en el mantenimiento de la funcionalidad normal de los hepatocitos. Este estudio tiene como objetivo analizar el papel de la inhibición de Frizzled-2 en la protección de los hepatocitos BRL-3A de rata de la hipoxia/reoxigenación (H/R). El modelo de hepatocitos H/R in vitro se demostró con el cultivo de células BRL-3A en condiciones de H/R. El ARNip de Frizzled-2 se transinfectó en células BRL-3A para inhibir la señalización de Frizzled-2. Wnt5a y Frizzled-2 aumentaron considerablemente en las células BRL-3A tras el tratamiento con H/R. El tratamiento con H/R provocó citotoxicidad celular, una tasa de apoptosis temprana y el nivel de Ca2+ intracelular en células BRL-3A mientras que el gen frizzled-2 silenciado redujo la citotoxicidad celular inducida por H/R, la apoptosis y el nivel de Ca2+ intracelular. El estudio in vivo con ratones mostró, además, la regulación al alza de la vía de Frizzled-2/Wnt 5 y la expresión de caspasa 3 escindida en tejidos hepáticos con lesión por isquemia y reperfusión (LIR). En resumen, la inhibición de Frizzled-2 por su ARNip puede proteger a las células BRL-3A al atenuar la citotoxicidad celular y la apoptosis inducida por H/R.

Palabras clave:
Frizzled-2
ARNip
Hipoxia/reoxigenación
Apoptosis
Ca2+ intracelular
Hepatocitos BRL-3A
Estudio de ratones in vivo

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