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Vol. 38. Núm. 4.
Páginas 159-165 (Abril 2020)
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Vol. 38. Núm. 4.
Páginas 159-165 (Abril 2020)
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DOI: 10.1016/j.eimc.2019.06.011
Presence of HPV DNA in extracellular vesicles from HeLa cells and cervical samples
Presencia de ADN de VPH en vesículas extracelulares de células HeLa y muestras cervicales
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Minerva Mata-Rochaa, Ruth Monserrat Rodríguez-Hernándezb, Pedro Chávez-Olmosc, Efraín Garridoc, Conrado Robles-Vázquezd, Sergio Aguilar-Ruizd, Honorio Torres-Aguilarb, Carolina González-Torrese, Javier Gaytan-Cervantese, Juan Manuel Mejía-Aranguréf, María de los Angeles Romero-Tlalolinig,
Autor para correspondencia
mdlaromerotl@conacyt.mx

Corresponding author.
a CONACyT-Unidad de Investigación Médica en Epidemiologia Clínica, Hospital de Pediatría, Centro Médico Nacional Siglo XXI, IMSS, Mexico City, Mexico
b Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma Benito Juárez de Oaxaca, Oaxaca, Mexico
c Departamento de Genética y Biología Molecular, CINVESTAV-IPN, Ciudad de México, Mexico
d Facultad de Medicina y Cirugía, Universidad Autónoma Benito Juárez de Oaxaca, Oaxaca, Mexico
e Laboratorio de secuenciación, Division de Desarrollo de la Investigacion, Centro Médico Nacional Siglo XXI, IMSS, Ciudad de México, Mexico
f Coordinación de Investigacion en Salud, IMSS, Torre Academia Nacional de Medicina, Ciudad de México, Mexico
g CONACYT-UABJO, Facultad de Medicina y Cirugía, Oaxaca, Mexico
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Table 1. Sequences of HPV from EV detected by NGS.
Table 2. Risk factors associated with HPV infection.
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Abstract
Introduction

The main cause of cervical cancer is an infection of keratinocytes in the basal layer of the stratified epithelium of the cervix by human papillomavirus (HPV). Other than in cervical samples, HPV DNA has been found in serum and other fluids but its origin is unclear. Extracellular vesicles (EV) could be a conveyance of viral DNA given their emerging role in cellular communication. The content of EV derived from cervical cells has not been properly explored and it is not known whether or not they contain HPV DNA.

Methods

We evaluated the DNA content of exosomes purified from cultures of HeLa cells by Next Generation Sequencing (NGS) and confirmed its presence by PCR. The presence of HPV DNA was also evaluated by PCR and NGS in EV from HPV-positive cervical samples without apparent lesion or with LSIL.

Results

We detected the integrated form of viral-DNA in exosomes from HeLa cells by NGS and confirmed its presence by PCR. The search for HPV sequences in EV obtained from cervical exudate samples without apparent lesion or with LSIL, where we expected to find the viral genome as an episome, indicated that HPV DNA, including the E6 and E7 oncogenes, is present in these EV.

Conclusion

HPV DNA, including the viral oncogenes E6/E7, is found in exosomes regardless of the integration status of the virus in the infected cell.

Keywords:
Exosomal DNA-seq
Exosomal HPV DNA
Exosomes of cervical exudate
Episomal HPV DNA in exosomes
Resumen
Introducción

La principal causa del cáncer de cérvix es la infección de los queratinocitos de la capa basal del epitelio estratificado del cuello uterino por el virus del papiloma humano (VPH). El ADN del VPH se ha encontrado en muestras cervicales, pero también en suero y otros fluidos, aunque su origen en estos últimos no está claro. Las vesículas extracelulares (VE) podrían ser el medio de transporte del ADN viral considerando su papel emergente en la comunicación celular. El contenido de las VE derivadas de células cervicales ha sido poco explorado y la presencia en ellas de ADN de VPH sigue siendo desconocida.

Métodos

Evaluamos el ADN de exosomas purificados a partir de cultivos de células HeLa mediante secuenciación de nueva generación (NGS) y confirmamos su presencia a través de PCR. La presencia de ADN de VPH también se evaluó mediante PCR y NGS en VE de muestras cervicales positivas a VPH, sin lesión aparente o con LSIL.

Resultados

Detectamos la forma integrada del ADN viral en exosomas de células HeLa mediante NGS, y confirmamos su presencia a través de PCR. La búsqueda de secuencias de VPH en VE obtenidas a partir de muestras de exudado cervical sin lesión aparente o con LSIL, donde esperamos encontrar el genoma viral en forma episomal, indicó que el DNA de VPH incluyendo los oncogenes E6 y E7, está presente en estas VE.

Conclusión

El ADN del VPH incluyendo el correspondiente con los oncogenes virales E6/E7 se encuentra en exosomas independientemente del estado de integración del virus en la célula infectada.

Palabras clave:
DNA-seq exosomal
DNA del VPH en exosomas
Exosomas de exudado cervical
DNA del VPH episomal en exosomas

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