Localización de arilsulfatasa A durante la incubación in vitro de espermatozoides humanos en medio de capacitación

Resumen

Objetivo

Conocer la localización y la distribución del receptor arilsulfatasa A (ARSA) en espermatozoides humanos antes y después de incubarlos en medio de capacitación durante 1 y 4 h.

Material y métodos

Las muestras seminales se obtuvieron de 5 donantes normozoospérmicos. La capacitación se llevó a cabo mediante la técnica de swim-up usando medio de capacitación durante 1 y 4 h. La localización del receptor ARSA se evaluó mediante inmunofluorescencia indirecta usando microscopia confocal. En cada condición fisiológica se observó un mínimo de 200 células.

Resultados

Antes de la incubación no se observó ningún patrón representativo entre las células positivas para este biomarcador (8,61%). Dicho porcentaje aumentó significativamente tras la incubación en medio de capacitación 1 y 4 h (61,86 y 63,38%, respectivamente). Entre las células capacitadas se observó un patrón mayoritario, con marcaje intenso en la región acrosomal (27,11 y 28,20% tras 1 y 4 h, respectivamente). Destacar que previamente a la incubación en los espermatozoides no se observó el patrón correspondiente a la fluorescencia a nivel de la región periacrosomal: solo tras incubar en medio de capacitación durante 1 y 4 h se detectaron un 9,13 y un 12,78% de células con dicha distribución.

Conclusiones

La capacitación in vitro, independientemente del tiempo, favorece la inmunolocalización de ARSA en la región cefálica de los espermatozoides. La subpoblación más representativa tras dicho proceso fue aquella en la que ARSA se distribuyó de forma intensa y homogénea en la región acrosomal, implicada en el reconocimiento primario entre gametos.

Abstract

Objective

To determine the localization and distribution of the Arylsulfatase A receptor (ARSA) in human spermatozoa before and after their incubation in capacitation medium for 1 and 4 hours.

Material and methods

Semen samples were obtained from five normozoospermic donors. Capacitation was by swim-up technique using capacitation medium for 1 and 4 hours. Localization of the ARSA receptor was assessed by indirect immunofluorescence using confocal microscopy. A minimum of 200 cells were observed in each physiological condition.

Results

Before incubation, no representative pattern was observed among the cells positive for this biomarker (8.61%). This percentage increased significantly after incubation in the capacitation medium for 1 and 4 hours (61.86% and 63.38% respectively). A majority pattern was observed among the capacitated cells, with intense labelling in the acrosomal region (27.11% and 28.20% after 1 and 4 hours respectively). It should be noted that the pattern corresponding to fluorescence at the level of the periacrosomal region was not observed in the spermatozoa prior to incubation. Only after incubation in capacitation medium for 1 and 4 hours, 9.13% and 12.78% of cells with such distribution were detected.

Conclusions

In vitro capacitation, regardless of time, favours the immunolocalization of ARSA in the cephalic region of the spermatozoa. The most representative subpopulation after this process was the one in which ARSA was intensely and homogeneously distributed in the acrosome region, involved in primary gamete recognition.