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Original
Caracterización microbiológica de los aislados de Listeria monocytogenes procedentes de casos humanos en Andalucía
Microbiological characterisation of Listeria monocytogenes isolates from human cases in Andalusia
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José A. Lepea,b,??
Autor para correspondencia
jalepe@cica.es

Autor para correspondencia.
, María José Torresb,c, Julia Liróa, Rafael Luquea, Javier Aznara,b,c, grupo LISAND-Microbiología
a Unidad Clínica de Enfermedades Infecciosas, Microbiología y Medicina Preventiva, Hospital Universitario Virgen del Rocío, Sevilla, España
b Instituto de Biomedicina de Sevilla (IBIS), Hospital Universitario Virgen del Rocío/CSIC/Universidad de Sevilla, Sevilla, España
c Departamento de Microbiología, Facultad de Medicina, Universidad de Sevilla, Sevilla, España
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Tabla 1. Características microbiológicas de los aislados de Listeria monocytogenes
Tabla 2. Distribución de pulsotipos y marcadores EC en los aislados de Listeria monocytogenes
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Resumen
Objetivo

El objetivo de este estudio fue caracterizar microbiológicamente 154 aislados de Listeria monocytogenes procedentes de casos humanos ocurridos en Andalucía en el período 2005-2009.

Material y métodos

La serotipificación se realizó mediante antisueros comerciales frente a antígenos somáticos de L. monocytogenes y por PCR multiplex de acuerdo con el método descrito por Doumith et al. (2004). La sensibilidad antibiótica fue estudiada por Epsilon test e interpretada por criterios CLSI. La relación clonal mediante PFGE de los fragmentos de restricción obtenidos con la enzima ApaI se realizó según protocolo PulseNet y el software Bionumerics. La identificación de clones epidémicos ECI, ECII y ECIII se estableció mediante un protocolo de PCR multiplex descrito por Chen y Knabel (2007).

Resultados

Los 154 aislados fueron agrupados en 4 serotipos: 4b [n=94 (61%)], 1/2b [n=30 (19%)], 1/2a [n=27 (18%)] y 1/2c [n=3 (2%)], siendo el 100% sensibles a ampicilina y cotrimoxazol. Se identificaron 62 pulsotipos diferentes. Treinta y siete aislados (24%) mostraron pulsotipos únicos, y los aislados restantes (76%) fueron asignados a 25 grupos PFGE (60% en grupos de más de 2 aislados). Los marcadores EC se encontraron en 62 (40,3%) aislados. El marcador de ECI estuvo presente en 43 (46,2%) de los aislados serotipo 4b, ECII en 10 (10,7%) aislados serotipo 4b, y ECIII en 9 (33,3%) aislados serotipo 1/2a.

Discusión

Una gran proporción de los aislados de L. monocytogenes pertenecientes a casos de listeriosis humana de nuestro estudio se agrupan clonalmente mediante técnicas de subtipado molecular, lo que sugiere la presencia de clones circulantes que podrían estar relacionados con brotes internacionales de origen alimentario o corresponder a cepas mas virulentas.

Palabras clave:
Listeriosis
Antibióticos
Pulsotipos
Clones epidémicos
España
Abstract
Objective

The aim of this study was to perform a retrospective study by genotyping 154 isolates from human listeriosis cases occurred in the region of Andalusia (southern Spain) in the period 2005-2009.

Material and methods

Serotyping was performed for 1 and 4 somatic antigens using commercial Listeria antisera, and by multiplex-PCR serogrouping according to the method described by Doumith et al. (2004). The antimicrobial susceptibility was performed by Epsilon test and interpreted by CLSI criteria. PFGE was performed according to the PulseNet protocol with the ApaI enzyme. The similarity of PFGE profiles was evaluated using the Bionumerics software. The multiplex PCR protocol described by Chen and Knabel (2007) was used for the identification of isolates belonging to L. monocytogenes ECI, ECII, and ECIII epidemic clones.

Results

The 154 isolates were grouped into four serotypes: 4b [94 (61%)] strains, 1/2b [30 (19%)] strains, 1/2a [27 (18%)] strains, and 1/2c [3 (2%)] strains, with 100% of susceptibility to ampicillin and cotrimoxazole. A further sixty-two ApaI distinct pulsotypes were recognized. Thirty-seven isolates (24%) showed unique ApaI pulsotypes, and the remaining 117 strains (76%) were assigned to 25 ApaI clusters (60% in clusters of more than two isolates). The EC markers were found in 62 (40.3%) of the L. monocytogenes isolates tested. The ECI marker was present in 43 (46.2%) 4b serotype isolates, ECII in 10 (10.7%) 4b serotype isolates, and ECIII in 9 (33,3%) 1/2a serotype isolates.

Discussion

A large proportion of the human listeriosis cases under investigation could be grouped into molecular subtype clusters, and our cases could be related to international food-borne outbreaks.

Keywords:
Listeriosis
Antibiotics
Pulsotypes
EC markers
Spain

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