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DOI: 10.1016/j.eimc.2008.11.021
Estudio comparativo entre una técnica de reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa en tiempo real, un método de enzimoinmunoanálisis y el cultivo shell-vial en la detección de virus gripales A y B en pacientes adultos
Comparison study of a real-time reverse transcription polymerase chain reaction assay with an enzyme immunoassay and shell vial culture for influenza A and B virus detection in adult patients
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Jordi Reinaa,
Autor para correspondencia
jorge.reina@ssib.es

Autor para correspondencia.
, Virginia Plasenciaa, Maria Leyesb, Antonio Nicolauc, Antonia Galmésc, Gabriel Arbonac
a Unidad de Virología, Servicio de Microbiología, Hospital Universitario Son Dureta, Mallorca, España
b Servicio de Medicina Interna, Hospital Universitario Son Dureta, Mallorca, España
c Servicio de Epidemiología, Consellería de Salut, Palma de Mallorca, España
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Tablas (3)
Tabla 1. Resultados comparativos obtenidos en la detección de virus gripal A
Tabla 2. Resultados comparativos obtenidos en la detección de virus gripal B
Tabla 3. Resultados obtenidos en la comparación entre la reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa en tiempo real y las otras técnicas diagnósticas
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Resumen
Introducción

Uno de los principales problemas en el diagnóstico de la gripe es el tipo de muestra y la edad del paciente. En general, la mayoría de las técnicas diagnósticas se han mostrado muy efectivas en los pacientes pediátricos y en los aspirados nasofaríngeos. Sin embargo, su eficacia se ha mostrado mucho menor en la población adulta y los frotis faríngeos.

Objetivo

Se ha realizado un estudio prospectivo comparativo sobre la eficacia de una técnica de RT-PCRtr (reverse transcription polymerase chain reaction in real time ‘reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa en tiempo real’) comercial, un enzimoinmunoanálisis (EIA) y el cultivo celular shell-vial (SV) en la detección de virus gripales A y B en 125 frotis faríngeos de pacientes adultos con sospecha clínica de gripe durante la temporada 2007–2008.

Material y métodos

A los frotis faríngeos se les realizó la detección antigénica gripal mediante un EIA dot-blot comercial. Para la RT-PCRtr se extrajo el ácido ribonucleico de 200μl de la muestra mediante el sistema de extracción automatizado EZ1 virus Mini Kit v2.0. La amplificación genómica se realizó mediante una RT-PCRtr utilizando el sistema comercial automatizado OneStep RT-PCR FluA + FluB y el SmartCycler como sistema de amplificación. Las muestras se inocularon en 2 viales de la línea celular Madin-Darby de riñón canino. El tiempo de respuesta se calculó como el transcurrido entre la llegada de la muestra hasta la obtención del resultado definitivo.

Resultados

El sistema EIA detectó 27 muestras positivas (21,6%), la RT-PCRtr 62 muestras positivas (49,6%) y el cultivo SV 56 muestras positivas (44,8%). De las 62 muestras positivas, el EIA detectó 27 muestras (43,5%), la RT-PCRtr 62 muestras (100%) y el SV 56 muestras (90,3%). El empleo de la RT-PCRtr permitió que en el 38,4% de los adultos el diagnóstico se obtuviera el mismo día de recepción de la muestra. Así, el 67,2% de los resultados se obtuvieron en las primeras 24h con un tiempo de respuesta medio de 1,1 días.

Conclusión

La técnica RT-PCRtr estudiada ha mostrado una elevada sensibilidad y especificidad, en comparación con las otras técnicas, en la detección de los virus gripales en los frotis faríngeos de la población adulta. Mediante esta técnica se puede procesar con facilidad un gran número de muestras, obtieniéndose resultados en el mismo día de la recepción de la muestra.

Palabras clave:
Virus gripales
Reacción en cadena de la polimerasa en transcripción reversa en tiempo real
Enzimoinmunoanálisis
Cultivo shell-vial
Adultos
Abstract
Introduction

The age of the patients and the type of sample are major problems in the diagnosis of influenza. Most available diagnostic techniques are highly effective in pediatric patients and in nasopharyngeal aspirates. However, in the adult population and using throat swabs, these techniques are much less reliable.

Aim

We performed a prospective study comparing the efficacy of a commercial real-time reverse transcription PCR assay (RT-PCR) with that of an enzyme immunoassay (EIA) or shell vial culture (SV) in the detection of influenza A and B viruses in 125 throat swabs from adults with clinically suspected influenza during the 2007–2008 flu season.

Material and methods

Throat swabs were subjected to rapid antigen detection for influenza viruses by means of a commercial dot-blot EIA. For the RT-PCR technique, RNA was extracted from 200μL of each sample by the automated extraction system, EZ1 virus minikit (version 2.0). Genomic amplification of the extracted viral RNA was carried out using the OneStep RT-PCR FluA+FluB automated system with the SmartCycler amplification system. Each sample was inoculated into 2 SV of the MDCK cell line. Turnaround times were calculated from the time specimens were received in the laboratory to the time the result was reported to clinicians.

Results

The EIA system detected 27 (21.6%) positive samples, RT-PCR 62 (49.6%) positive samples, and SV 56 (44.8%) positive samples. Among the 62 positive samples, EIA detected 27 (43.5%), RT-PCR 62 (100%) and SV 56 (90.3%). With the use of RT-PCR, 38.4% of the adults studied were diagnosed on the same day samples were received. Among the total, 67.2% of diagnostic results were obtained within the first 24 hours; turnaround time was 1.1 days.

Conclusion

The real-time RT-PCR method studied displayed high sensitivity and specificity in the detection of influenza virus in adult patients, when compared with the conventional techniques. With real-time RT-PCR, large numbers of samples can be rapidly tested and results provided the same day samples are received.

Keywords:
Influenza viruses
Real-time reverse transcription polymerase chain reaction
Enzyme immunoassay
Shell vial culture
Adults

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