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Vol. 37. Núm. 10.
Páginas 679-680 (Diciembre 2019)
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Diagnóstico diferencial de Bordetella bronchiseptica por RT-PCR en un niño con tos paroxística sin antecedentes patológicos previos
Differential diagnosis by RT-PCR of Bordetella bronchiseptica in a child without previous pathologic antecedents suffering whooping cough
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Juan Carlos Sanza,
Autor para correspondencia
juan.sanz@salud.madrid.org

Autor para correspondencia.
, Raquel Abadb, Carmen Sanzc, Angel Miguelc
a Unidad de Microbiología Clínica, Laboratorio Regional de Salud Pública de la Comunidad de Madrid, Dirección General de Salud Pública, Consejería de Sanidad, Comunidad de Madrid, Centro de Especialidades Médicas Vicente Soldevilla, Madrid, España
b Unidad de Neisseria, Listeria y Bordetella, Laboratorio de Referencia e Investigación en Enfermedades Bacterianas Prevenibles por Vacunación, Centro Nacional de Microbiología, Instituto de Salud Carlos III, Majadahonda, Madrid, España
c Área Única de Salud Pública 3, Dirección General de Salud Pública, Consejería de Sanidad, Comunidad de Madrid, Alcalá de Henares, Madrid, España
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Tabla 1. Algoritmo de los ensayos RT-PCR multimarcador para la identificación de las principales especies de Bordetella spp.
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El género Bordetella incluye varias especies que pueden afectar al ser humano1. Entre ellas destaca por su relevancia clínico-epidemiológica B. pertussis2. Sin embargo, otras especies como B. parapertussis, B. holmesii1, y en ocasiones, B. bronchiseptica3,4 pueden originar cuadros pertusoides similares.

El objetivo del presente estudio fue describir un caso de infección por B. bronchiseptica, y la estrategia empleada para su diagnóstico microbiológico. Varón de 21 meses, sin historial clínico de enfermedades respiratorias crónicas o alteraciones inmunológicas, que acudió a urgencias con tos paroxística y emetizante de 9 días de evolución, sin apnea, pero acompañada de estridor. El paciente se encontraba correctamente inmunizado para su edad frente a tos ferina, con 3 dosis de vacuna antidiftérica, antitetánica, antipertusis acelular administradas a los 2, 4 y 11 meses. La familia convivía con un perro que no había presentado indicios de enfermedad.

Ante este cuadro compatible con un síndrome pertusoide, se obtuvieron muestras de lavado nasofaríngeo, y se pautó una dosis inicial de azitromicina a 10mg/kg/día seguida de un tratamiento domiciliario con 5mg/kg/día durante 4 días. El paciente evolucionó favorablemente, sin complicaciones. La muestra de lavado nasofaríngeo se estudió mediante una técnica comercial de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) múltiple (Smart Bp/Bpp, Cepheid AB, Suecia), basada en la detección de las secuencias de inserción IS481 e IS1001. De acuerdo a las instrucciones del fabricante, los resultados fueron presuntivamente clasificados como positivos tanto para B. pertussis como para B. parapertussis. La muestra fue posteriormente procesada empleando 5 ensayos independientes de RT-PCR frente a diferentes marcadores: IS481, IS1001, región promotora del gen de la toxina pertusis (BPTP), gen de una proteína porina de B. pertussis (BPTD_0837) y la secuencia de inserción similar a la IS1001 de B. holmesii (hIS1001). Los resultados obtenidos (IS481 confirmado como positivo, IS1001 confirmado como positivo, BPTP positivo, BPTD_0837 negativo y hIS1001 negativo) aportaron una identificaron como B. bronchiseptica de acuerdo al algoritmo descrito en la tabla 1.

Tabla 1.

Algoritmo de los ensayos RT-PCR multimarcador para la identificación de las principales especies de Bordetella spp.

Interpretación  Resultado de los ensayos
  IS482  BPTP  BPTD_0837  IS1001  hIS1001 
B. pertussis  −  − 
B. parapertussis  −  −  −  − 
B. holmesii  −  −  − 
B. bronchiseptica  ±  −  ±  − 

Si bien B. bronchiseptica crece en medios habituales como agar MacConkey, el cultivo de B. pertussis es problemático y carece de sensibilidad. Por este motivo en la actualidad el diagnóstico de tos ferina se basa en técnicas de PCR sobre muestras nasofaríngeas, utilizando varias dianas como los segmentos de inserción IS481 e IS1001, empleadas para identificar como probables a B. pertussis y B. parapertussis, respectivamente5,6. No obstante, estas secuencias no son absolutamente específicas de estas especies6. La secuencia IS481 puede hallarse junto con B. pertussis en B. holmesii y en algunas cepas de B. bronchiseptica6. Por su parte la secuencia IS1001 puede estar presente, además de en B. parapertussis, en B. bronchiseptica6. Esta secuencia muestra también gran homología con hIS1001, presente en B. holmesii5. Un resultado de PCR simultáneamente positivo para IS481 y S1001 podría inicialmente considerarse una coinfección por diferentes especies de Bordetella6. En estas situaciones, el uso de otras dianas de amplificación puede aclarar el diagnóstico. Tanto B. pertussis como B. bronchiseptica son positivas para BPTP7. Sin embargo, el gen BPTD_0837 es específico de B. pertussis y no muestra reactividad cruzada con otras especies de Bordetella8. Otros autores han empleado como marcadores dos genes estructurales de la flagelina, uno común para B. bronchiseptica/B. parapertussis (Bb/Bpp-Fla) y otro distintivo de B. parapertussis (Bpp2-Fla)9.

Entre las limitaciones de este estudio hay que mencionar que no se llevó a cabo un cultivo bacteriano, no se efectuó un diagnóstico virológico diferencial ni se realizó la secuenciación de los productos de amplificación para corroborar definitivamente el resultado.

B. bronchiseptica se considera un microorganismo oportunista que puede infectar especialmente el tracto respiratorio de pacientes con inmunodepresión o fibrosis quística3,4. B. bronchiseptica produce infecciones en diferentes mamíferos1 y su transmisión se ha relacionado con la convivencia con mascotas4. La prevalencia de colonización en perros sanos parece ser importante10. Aunque en el presente caso asumimos que B. bronchiseptica fue la probable causa del cuadro de síndrome pertusoide en función de su detección molecular, no es posible asegurar que no se tratara simplemente de un mero comensal. No obstante, este microorganismo se debe tener en cuenta en el diagnóstico diferencial de B. pertussis y B. parapertussis cuando se emplean técnicas comerciales de RT-PCR.

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