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Single-tube classical PCR for Candida auris and Candida haemulonii identification
PCR múltiple para la identificación de Candida auris y Candida haemulonii
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Laura Theilla, Catiana Dudiuka,b, Soraya Morales-Lopezc,d, Indira Berrioe,f, José Yesid Rodríguezg, Adriana Marinh, Soledad Gamarraa, Guillermo Garcia-Effrona,b,
Autor para correspondencia
ggarcia@unl.edu.ar

Corresponding author at: Laboratorio de Micología y Diagnóstico Molecular (CONICET) – Cátedra de Parasitología y Micología – Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas – Ciudad Universitaria, Paraje el Pozo S/N, Santa Fe, Santa Fe CP 3000 Argentina.
a Laboratorio de Micología y Diagnóstico Molecular – Cátedra de Parasitología y Micología – Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas – Universidad Nacional del Litoral, Santa Fe, Argentina
b Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET), CCT-Santa Fe, Argentina
c Universidad Popular del Cesar, Valledupar, Colombia
d Laboratorios Nancy Flórez García S.A.S, Valledupar, Colombia
e Medical and Experimental Mycology Group, Corporación para Investigaciones Biológicas (CIB), Medellín, Colombia
f Hospital General de Medellín “Luz Castro de Gutiérrez” ESE, Medellín, Colombia
g Centro de Investigaciones Microbiológicas del Cesar – CIMCE Ltda, Valledupar, Colombia
h Clínica General del Norte, Barranquilla, Colombia
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Recibido 06 mayo 2017. Aceptado 26 enero 2018
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Abstract
Background

Candida auris and Candida haemulonii are emerging and multiresistant pathogens. C. auris has produced hospital outbreaks and is misidentified by phenotypic-based methods. The only reliable identification methods are DNA sequencing and MALDI-TOF.

Aims

To develop a classical-PCR method capable of rapidly and accurately identify C. auris and C. haemulonii.

Methods

A multiplex PCR was carried out in one tube that included an internal control and oligonucleotides that specifically hybridize to the ITS2 region of C. auris and C. haemulonii. The usefulness of the new method was verified by testing a collection of 50 strains of 20 different species (previously identified by ITS sequencing). The selection of species was made in order to emulate the C. auris panel used by the CDC to validate diagnostic tools. In addition, other yeast species not included in the aforementioned panel were incorporated based on reported identification errors.

Results

The results obtained with the proposed protocol were in total agreement with those obtained by ITS sequencing.

Conclusions

We present a PCR method able to unequivocally identify C. auris and differentiate it from C. haemulonii. It is inexpensive, fast and it could be a useful tool to reduce the chances of a C. auris outbreak.

Keywords:
Candida auris
Molecular identification
Candida haemulonii
Resumen
Antecedentes

Candida auris y Candida haemulonii son patógenos emergentes y multirresistentes. C. auris ha sido responsable de brotes hospitalarios y no se puede identificar por métodos fenotípicos. Los únicos métodos de identificación confiables incluyen la secuenciación y el MALDI-TOF.

Objetivos

Desarrollar un método de PCR clásica capaz de identificar rápidamente C. auris y C. haemulonii.

Métodos

Se llevó a cabo una PCR múltiple en un tubo que incluyó un control interno y oligonucleótidos que hibridan específicamente con la región ITS2 de C. auris y C. haemulonii. Para comprobar la utilidad del método se utilizó una colección de 50 aislamientos de 20 especies diferentes (identificadas por secuenciación del ITS). La selección de especies se hizo con el fin de emular el panel de especies que ofrece el CDC para la correcta identificación de C. auris. Además, se incluyeron especies que son confundidas con C. auris y no están incluidas en el citado panel.

Resultados

Los resultados obtenidos con el protocolo propuesto estuvieron en total acuerdo con los obtenidos por la secuenciación del ITS.

Conclusiones

El método que presentamos es capaz de identificar inequívocamente C. auris y diferenciarla de C. haemulonii. Es barato, rápido y podría ser una herramienta útil para reducir la posibilidad de brotes por C. auris.

Palabras clave:
Candida auris
Identificación molecular
Candida haemulonii

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