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Proteases of Sporothrix schenckii: Cytopathological effects on a host-cell model
Proteasas de Sporothrix schenckii: efectos citopatológicos en un modelo de células huésped
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Myrna Sabanero Lópeza,
Autor para correspondencia
myrna.sabanero@gmail.com

Corresponding author.
, Lérida L. Flores Villavicencioa, Karla Soto Arredondoa, Gloria Barbosa Sabanerob, Julio César Villagómez-Castroa, Gustavo Cruz Jiménezc, Gerardo Sandoval Bernala, Haydee Torres Guerrerod
a Departamento de Biología, División de Ciencias Naturales y Exactas, Campus Guanajuato, Universidad de Guanajuato, Noria Alta S/N, Col. Noria Alta, Guanajuato, Guanajuato 36000, Mexico
b Departamento de Ciencias Médicas, División de Ciencias de la Salud, Campus León, Universidad de Guanajuato, 20 de Enero 292, Col. Obregón, León, Guanajuato 37320, Mexico
c Departamento de Farmacia, División de Ciencias Naturales y Exactas, Campus Guanajuato, Universidad de Guanajuato, Noria Alta S/N, Col. Noria Alta, Guanajuato, Guanajuato 36000, Mexico
d Laboratorio de Micología Básica, Unidad de Medicina Experimental, Facultad de Medicina, UNAM, Dr. Balmis No. 148, Col. Doctores, Del. Cuauhtémoc, Mexico, DF, Mexico
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Recibido 14 mayo 2015. Aceptado 11 mayo 2017
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Table 1. Proteolytic activity of S. schenckii. Determination of specific enzyme activity at pH 7.0 using azocoll as substrate. It shows the activity of type IV collagenase used as a control and intracellular and extracellular proteolytic activities of S. schenckii.
Abstract
Background

Sporotrichosis is a fungal infection caused by the Sporothrix schenckii complex. The adhesion of the fungus to the host tissue has been considered the key step in the colonization and invasion, but little is known about the early events in the host–parasite interaction.

Aims

To evaluate the proteolytic activity of S. schenckii on epithelial cells.

Methods

The proteolytic system (at pH 5 and 7) was evaluated using azocoll and zymograms. The host–parasite interaction and epithelial cell response were also analyzed by examining the microfilament cytoskeleton using phalloidin-FITC and transmission electron microscopy. Finally, the metabolic activity was determined using an XTT assay.

Results

The zymograms showed that S. schenckii yeast cells possess high intracellular and extracellular proteolytic activities (Mr200, 116, 97, and 70kDa) that are pH dependent and are inhibited by PMSF and E64, which act on serine and cysteine-type proteases. During the epithelial cell–protease interaction, the cells showed alterations in the microfilament distribution, as well as in the plasma membrane structure. Moreover, the metabolic activity of the epithelial cells decreased 60% without a protease inhibitor.

Conclusions

Our data demonstrate the complexity of the cellular responses during the infection process. This process is somehow counteracted by the action of proteases inhibitors. Furthermore, the results provide critical information for understanding the nature of host–fungus interactions and for searching a new effective antifungal therapy, which includes protease inhibitors.

Keywords:
Sporothrix schenckii
Proteases
Epithelium
Interactions
Cytoskeleton
Resumen
Antecedentes

La esporotricosis es una infección fúngica causada por el complejo Sporothrix schenckii. La adhesión del hongo al tejido hospedero se ha considerado un paso clave en la colonización e invasión, sin embargo poco se conoce de los eventos tempranos en la interacción hospedero-parasito.

Objetivos

Evaluar la actividad proteolítica de S. schenckii en células epiteliales.

Métodos

El sistema proteolítico (bajo los valores pH 5 y 7) fue evaluado mediante azocoll y zimogramas. Además, la interacción hospedero-parasito y la respuesta celular fueron analizadas con el examen de los microfilamentos del citoesqueleto mediante faloidina-FITC y microscopia electrónica de transmisión. Finalmente, la actividad metabólica (viabilidad celular) fue determinada por un ensayo de XTT.

Resultados

Los zimogramas de S. schenckii muestran que posee una alta actividad proteolítica intracelular y extracelular (Mr200, 116, 97 y 70kD) dependientes de pH e inhibidas por PMSF y E64, que actúan sobre serin- y cistein proteasas. Durante la interacción de las células epiteliales-proteasas, las células mostraron alteraciones en la distribución de los microfilamentos y la estructura de la membrana plasmática. Además, la actividad metabólica (viabilidad celular) de las células epiteliales disminuyó un 60% sin inhibidores de proteasas.

Conclusiones

Nuestros datos demuestran la complejidad de la respuesta celular durante el proceso de infección, proceso que puede ser en parte contrarrestado por la acción de los inhibidores de proteasas. Además, los resultados proporcionan información crítica para el entendimiento de la naturaleza en la interacción hospedero-hongo y para una nueva terapia antifúngica eficaz que incluya inhibidores de proteasas.

Palabras clave:
Sporothrix schenckii
Proteasas
Epitelio
Interacción
Citoesqueleto

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