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Vol. 126. Núm. 12.
Páginas 452-454 (Abril 2006)
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Vol. 126. Núm. 12.
Páginas 452-454 (Abril 2006)
Hipermetilación del promotor del gen reparador hMLH1 en la patogenia del carcinoma de células renales esporádico
Promoter hypermethylation status of the mismatch repair gene hMLH1 in patients with sporadic renal cell carcinoma
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Antonio S Salinas-Sáncheza, Antonio Rubio-del-Campob, Francisco Sánchez-Sáncheza, José M Giménez-Bachsa, María J Donate-Morenoa, Dolores C García-Olmob, Julio Escribano-Martíneza
a Área de Genética. Facultad de Medicina/CRIB. Universidad de Castilla-La Mancha. Albacete. España.
b Unidad de Investigación. Complejo Hospitalario y Universitario de Albacete. Albacete.
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Fig. 1. Localización de los 4 sitios de metilación estudiados en el promotor del gen hMLH1. Las flechas del mismo color indican la localización de los cebadores empleados para amplificar cada uno de los fragmentos que contienen en su interior un sitio metilable, nombrados como S1, S2, S3 y S4. El número entre paréntesis indica la posición de cada sitio en el promotor.
Fig. 2. Análisis del estado de metilación del promotor del gen hMLH1. Se indica en cada calle del gel la enzima con la que se digirió el ADN molde. El control positivo (C+) de la reacción en cadena de la polimerasa se realizó con ADN sin digerir, y el control negativo (C­) no incluyó ADN. Ejemplo representativo (A) obtenido a partir de uno de los tumores analizados en este estudio y control negativo de metilación (B), realizado con ADN genómico purificado a partir de sangre de individuos sanos. Como controles positivos de metilación se empleó ADN previamente metilado con la enzima HpaII metilasa (C) y ADN de la línea celular 293T, en la que el promotor del gen hMLH1 se encuentra inactivado por metilación (D). M: marcador de tamaño molecular; pb: pares de bases.
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Background and objective: Epigenetic inactivation is a gene function abnormality that produces no changes in the DNA sequence, with the most frequent epigenetic alteration being hypermethylation of CpG islands in the promoter regions of the genes. Based on recent indications of a potential relationship between mismatch repair genes and renal cell carcinoma (RCC), we were interested in investigating the existence of promoter hypermethylation of the hMLH1 gene in tumor DNA samples from patients with sporadic RCC. Material and method: Sixty-five tumor tissue specimens were collected consecutively. The DNA was first obtained and purified, then digested with the restriction enzymes Hpa II and Msp I, followed by polimerase chain reaction amplification of 3 promoter regions of the hMLH1 gene, agarose gel electrophoresis, and densitometric analysis of the images of the amplified bands. Results: Mean patient age was 63.7 years. The most frequent cell type was clear cell carcinoma (67.7%). 73.9% of tumors were diagnosed in stages below pT2, 9.3% had gland involvement and 20%, distant metastasis. No somatic hypermethylation was detected in the promoter region of the hMLH1 gene in any of the patients studied. Conclusions: Our data indicate that promoter hypermethylation of the hMLH1 gene is not implicated in the pathogenesis of sporadic RCC, and therefore the existence of another type of mutation, microsatellite instability and/or loss of heterozygosity should be examined to determine the possible role of this gene in sporadic RCC.
Keywords:
Methylation
Renal cell carcinoma
hMLH1 gene
Mismatch repair genes
Fundamento y objetivo: La metilación de los islotes CpG (secuencias del genoma ricas en guanina y citosina) presentes en las regiones promotoras constituye la forma de inactivación epigenética más común y es una alteración en el mecanismo de regulación de los genes que no requiere cambios en la secuencia del ADN. Se ha descrito hipermetilación del promotor del gen hMLH1 en algunas líneas celulares procedentes de carcinoma de células renales (CCR). Nuestro objetivo ha sido determinar la existencia de hipermetilación en el promotor del gen hMLH1 en muestras de ADN tumoral de pacientes con CCR esporádico. Material y método: Se recogieron consecutivamente 65 muestras de tejido tumoral procedente de pacientes diagnosticados de CCR. Tras la obtención y purificación del ADN se procedió a su digestión con las enzimas de restricción HpaII y MspI, seguido de amplificación mediante reacción en cadena de la polimerasa de 3 regiones del promotor del gen hMLH1, electroforesis en gel de agarosa y análisis densitométrico de las bandas amplificadas. Resultados: La edad media de los pacientes fue de 63,7 años. El tipo celular más frecuente fue el carcinoma de células claras (67,7%). Un 73,9% de los tumores se diagnosticaron en estadios inferiores a pT2, un 9,3% tenían afectación ganglionar y un 20%, metástasis a distancia. No se detectó hipermetilación somática en la región promotora del gen hMLH1 en ninguno de los pacientes estudiados. Conclusiones: La hipermetilación del promotor del gen hMLH1 no parece intervenir en la patogenia del CCR esporádico, y es necesario analizar la existencia de otro tipo de mutaciones, inestabilidad de microsatélites y/o pérdida de heterocigosis para determinar el posible papel de este gen en la patogenia del CCR esporádico.
Palabras clave:
Metilación
Carcinoma de células renales
hMLH1
Genes reparadores alterados

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