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Uso del medio Granada y control de calidad de medios de cultivo

Use of Granada medium and quality control of culture media

Manuel de la Rosa a, Javier Rodríguez-Granger a, Mercedes Pérez-Ruiz a, Antonio Sampedro a

a Servicio de Microbiología.Hospital Virgen de las Nieves. Granada.

Sr. Director: Actualmente el medio Granada1 es ampliamente usado en los hospitales españoles para detección e identificación directa de Streptococcus agalactiae, estreptococo grupo B (EGB)2,3. Este medio posee una sensibilidad análoga para detectar EGB que la técnica de enriquecimiento selectivo, siendo su uso más rápido y simple4. El medio Granada es también aconsejado por las Sociedades Españolas de Obstretricia y Ginecología y de Neonatología para detectar EGB en la semana 35-37 de gestación en muestras anorectales para seleccionar las embarazadas candidatas a profilaxis antibiótica intraparto para prevenir la infección neonatal precoz por EGB5.

El medio Granada está comercializado en España (Soria Greiner, Biomedics, Alcobendas, Madrid), en el Reino Unido (E&O Laboratories Ltd. Bonnybridge, Scotland ) y en EE.UU. (Hardy Diagnostics, Santa Maria, CA; Salte Lake City, UT; Phoenix, AZ).

Como equipo de microbiólogos que diseñamos este medio, hemos de indicar que la eficacia del medio Granada es dependiente de un correcto proceso de fabricación y de su adecuda conservación. Es indispensable que el fabricante utilice el tipo de peptona adecuado (proteosa peptona nº 3; Difco) y el tipo de almidón adecuado (Merck 1252)6,7. La utilización de otros productos o una conservación inadecuada del medio (siempre debe guardarse en frigorífico) producen una importante pérdida de sensibilidad.

Por ello el medio Granada debe ser adquirido de un suministrador de garantía o ser preparado en el propio laboratorio, y en ningún caso debe utilizarse más allá de la fecha de caducidad o cuando no exista seguridad de que su conservación ha sido correcta. El no seguir estas precauciones puede originar resultados falsamente negativos.

Ante cualquier duda sobre la eficacia de un lote de medio Granada tanto si se prepara en el laboratorio o si se adquiere de un suministrador, éste debe ser controlado. Como con otros medios delicados (por ejemplo NYC, Thayer Martin, medios para Bordetella, medios para Campylobacter spp., etc.), la buena práctica obliga a efectuar control de calidad al recibir cada lote de medio comercial o antes de usar un lote preparado en el laboratorio8. También (como con cualquier otro medio de caducidad limitada) es necesario efectuar control de calidad si se observan resultados anómalos que pueden ser provocados por condiciones de conservación no óptimas (rotura de la cadena de frío). La manera más fácil es inocular cualquier cepa hemolítica de S. agalactiae en placas o tubos de medio Granada. Las placas deben incubarse en anaerobiosis o utilizando la técnica del cubreobjetos9 y los tubos se incuban en aerobiosis. En todos los casos deberán aparecer colonias pigmentadas naranja o rojas al cabo de 18-24 h de incubación a 35-37°C, si ello no es así el lote debe desecharse.

Una alternativa al uso del medio Granada en placas o tubos cuando no sea posible obtener un suministro regular adecuado o garantizar su correcta conservación es la utilización de la nueva forma del medio como polvo seco de reconstrucción instantánea (medio Granada instantáneo) recientemente comercializado en España y en la Unión Europea (Biomedics, Alcobendas, Madrid).

Como microbiólogos que hemos desarrollado este medio y que llevamos preparándolo y usándolo sin problemas durante más de diez años, nos ofrecemos a aclarar cualquier duda que pueda surgir en su uso y a facilitar la información que se nos pida por los laboratorios de Microbiología que deseen prepararlo.

Bibliografía

1.Rosa M, Pérez M, Carazo C, Pareja L, Peis JI, Hernández F. New Granada Medium for detection and identification of Group B streptococci. J Clin Microbiol 1992; 30: 1.019-1.021.
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2.García Gil E, Rodríguez MC, Bartolome R, Bejarano B, Cabero L, Andreu A. Evaluation of Granda agar plate for detection of vaginal and rectal Group B streptococci in pregnant women. J Clin Microbiol 1999; 37: 2.648-2.651.
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3.Mazon A, Salvo MS, Ezcurra R. Resultados del programa de prevención de la infección neonatal por estreptococo del grupo B. Prog Obstet Gynecosl 2000; 43: 233-236.
4.Koneman EW, Allen DD, Janda WM, Schreckenberger Pc, Winn WC. The Gram-positive cocci. En: Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. (5th ed.). Philadelphia: Lippincott, 1997; 608.
5.Sociedad Española de obstetricia y ginecología. Sociedad Española de Neonatología. Recomendaciones para la prevención de la infección perinatal por estreptococo grupo B. Prog Obstet Ginecol 1998; 41: 431-435.
6.Rosa-Fraile M, Sampedro A, Ruiz-Bravo A, Sanbonmatsu S, Giménez Gallego G. Identification of serum and urine proteins responsible for enhanced pigment production by Group B streptococci as amylases. Clin Diagn Lab Immunol 1996; 3: 594-596.
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7.Rosa-Fraile M, Sampedro A, Varela J, García-Peña M, Giménez-Gallego G. Identification of a peptide from mammal albumins responsible for enhanced pigment production by group B streptococci. Clin Diagn Lab Immunol 1999; 6: 425-426.
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8.National Committee for Clinical Laboratory Standars. Documento NCCLS M22-A. Quality assurance for conmmercially prepared culture media. Villanova 1987.
9.Rosa-Fraile M, Rodriguez-Granger J, Cueto-López M, Sampedro A, Biel Gaye E, Haro JM, Andreu A. Use of Granada Medium to detect Group B streptococcal colonization in pregnant Women. J Clin Microbiol 1999; 37: 2.674-2.677
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